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土壤全氮測(cè)定 ---半微量開(kāi)氏法

日期：2025-02-06 12:52
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摘要：
土壤全氮測(cè)定 ---半微量開(kāi)氏法
4.2.2.1方法原理  樣品在加速劑的參與下，用濃硫酸消煮時(shí)，各種含氮有機(jī)物，經(jīng)過(guò)復(fù)雜的高溫分解反應(yīng)，轉(zhuǎn)化為氨與硫酸結(jié)合成硫酸銨。堿化后蒸餾出來(lái)的氨用硼酸吸收，以標(biāo)準(zhǔn)酸溶液滴定，求出土壤全氮量（不包括全部硝態(tài)氮）。
包括硝態(tài)和亞硝態(tài)氮的全氮測(cè)定，在樣品消煮前，需先用高錳酸鉀將樣品中的亞硝態(tài)氮氧化為硝態(tài)氮后，再用還原鐵粉使全部硝態(tài)氮還原，轉(zhuǎn)化成銨態(tài)氮。
在高溫下硫酸是一種強(qiáng)氧化劑，能氧化有機(jī)化合物中的碳，生成CO2，從而分解有機(jī)質(zhì)。
2H2SO4+C→2H2O+2SO2↑+ CO2↑高溫
樣品中的含氮有機(jī)化合物，如蛋白質(zhì)在濃H2SO4的作用下，水解成為氨基酸，氨基酸又在H2SO4的脫氨作用下，還原成氨，氨與H2SO4結(jié)合成為硫酸銨留在溶液中。
Se的催化過(guò)程如下：
2H2SO4+Se→H2SeO3+2SO2↑+ H2O
                                                亞硒酸
H2SeO3→SeO2+H2O
SeO2+C→Se+CO2
由于Se的催化效能高，一般常量法Se粉用量不超過(guò)0.1～0.2g，如用量過(guò)多則將引起氮的損失。
(NH4)2SO4+H2SeO3→(NH4)2 SeO3+H2SO4
3(NH4)2 SeO3→2NH3+3Se+9H2O+2N2↑
以Se作催化劑的消煮液，也不能用于氮磷聯(lián)合測(cè)定。硒是一種有毒元素，在消化過(guò)程中，放出H2Se。H2Se的毒性較H2S更大，易引起人中毒。所以，實(shí)驗(yàn)室要有良好的通風(fēng)設(shè)備，方可使用這種催化劑。
Δ
4CuSO4+3C+2H2SO4→2Cu2SO4+4SO2↑+3CO2↑+2H2O
Cu2SO4+2H2SO4→2CuSO4+2H2O+ SO2↑
                     褐紅色               藍(lán)綠色
當(dāng)土壤中有機(jī)質(zhì)分解完畢，碳質(zhì)被氧化后，消煮液則呈現(xiàn)清澈的藍(lán)綠色即“清亮”，因此硫酸銅不僅起催化作用，也起指示作用。同時(shí)應(yīng)該注意開(kāi)氏法剛剛清亮并不表示所有的氮均已轉(zhuǎn)化為銨，有機(jī)雜環(huán)態(tài)氮還未完全轉(zhuǎn)化為銨態(tài)氮，因此消煮液清亮后仍需消煮一段時(shí)間，這個(gè)過(guò)程叫“后煮”。
消煮液中硫酸銨加堿蒸餾，使氨逸出，以硼酸吸收之，然后用標(biāo)準(zhǔn)酸液滴定之。
蒸餾過(guò)程的反應(yīng)：
(NH4)2SO4+2NaOH→Na2SO4+2NH3+2H2O
NH3+H2O→NH4OH
NH4OH+H3BO3→NH4·H2BO3+H2O
滴定過(guò)程的反應(yīng)：
2NH4·H2BO3+ H2SO4→(NH4)2SO4+ H2O
4.2.2.2主要儀器  消煮爐、半微量定氮蒸餾裝置（圖4-2）、半微量滴定管(5mL)。
4.2.2.3試劑
（1）硫酸。 ρ=1.84g·mL-1，化學(xué)純；
（2）10mol·L-1NaOH溶液。 稱取工業(yè)用固體NaOH420g，于硬質(zhì)玻璃燒杯中，加蒸餾400mL溶解，不斷攪拌，以防止燒杯底角固結(jié)，冷卻后倒入塑料試劑瓶，加塞，防止吸收空氣中的CO2，放置幾天待Na2CO3沉降后，將清液虹吸入盛有約160mL無(wú)CO2的水中，并以去CO2的蒸餾水定容1L加蓋橡皮塞。
（3）甲基紅—溴甲酚綠混合指示劑。0.5g溴甲酚綠和0.1g甲基紅溶于100mL乙醇中（注1）。
（4）20g·L-1 H2BO3—指示劑。20g H2BO3（化學(xué)純）溶于1L水中，每升H2BO3溶液中加入甲基紅—溴甲酚綠混合指示劑5mL并用稀酸或稀堿調(diào)節(jié)至微紫紅色，此時(shí)該溶液的pH為4.8。指示劑用前與硼酸混合，此試劑宜現(xiàn)配，不宜久放。
（5）混合加速劑。K2SO4:CuSO4:Se=100:10:1即100g K2SO4（化學(xué)純）、10g CuSO4 ·5H2O（化學(xué)純）、和1g Se粉混合研磨，通過(guò)80號(hào)篩充分混勻（注意戴口罩），貯于具塞瓶中。消煮時(shí)每毫升H2SO4加0.37g混合加速劑。
（6）0.02 mol·L-1（1/2 H2SO4）標(biāo)準(zhǔn)溶液。量取H2SO4（化學(xué)純、無(wú)氮、ρ=1.84g·mL-1）2.83mL，加水稀釋至5000mL，然后用標(biāo)準(zhǔn)堿或硼砂標(biāo)定之。
（7）0.01 mol·L-1（1/2 H2SO4）標(biāo)準(zhǔn)液。將0.02 mol·L-1（1/2 H2SO4）標(biāo)準(zhǔn)溶液用水準(zhǔn)確稀釋一倍。
（8）高錳酸鉀溶液。25g高錳酸鉀（分析純）溶于500mL無(wú)離子水，貯于棕色瓶中。
（9）1:1硫酸（化學(xué)純、無(wú)氮、ρ=1.84g·mL-1）。硫酸與等體積水混合。
（10）還原鐵粉。磨細(xì)通過(guò)孔徑0.15mm（100號(hào)）篩。
（11）辛醇。
4.2.2.4測(cè)定步驟
（1）稱取風(fēng)干土樣（通過(guò)孔徑0.149mm篩）1.0000g[含氮約1mg（注2）]，同時(shí)測(cè)定土樣水分含量。
（2）土樣消煮
①不包括硝態(tài)氮和亞硝態(tài)氮的消煮：將土樣送入干燥的開(kāi)氏瓶（或消煮管）底部，加少量無(wú)離子水（0.5～1mL）濕潤(rùn)土樣后（注3），加入加速劑2g和濃硫酸5mL，搖勻，將開(kāi)氏瓶?jī)A斜置于300W變溫電爐上，用小火加熱，待瓶?jī)?nèi)反應(yīng)緩和時(shí)（10～15min），加強(qiáng)火力使消煮的土液保持微沸，加熱的部位不超過(guò)瓶中的液面，以防瓶壁溫度過(guò)高而使銨鹽受熱分解，導(dǎo)致氮素?fù)p失。消煮的溫度以硫酸蒸氣在瓶頸上部1/3處冷凝回流為宜。待消煮液和土粒全部變?yōu)榛野咨詭ЬG色后，再繼續(xù)消煮1h。消煮完畢，冷卻，待蒸餾。在消煮土樣的同時(shí)，做兩份空白測(cè)定，除不加土樣外，其他操作皆與測(cè)定土樣相同。
②包括硝態(tài)氮和亞硝態(tài)氮的消煮：將土樣送入干燥的開(kāi)氏瓶（或消煮管）底部，加高錳酸鉀溶液1mL，搖動(dòng)開(kāi)氏瓶，緩緩加入1:1硫酸2 mL，不斷轉(zhuǎn)動(dòng)開(kāi)氏瓶，然后放置5min，再加入1滴辛醇。通過(guò)長(zhǎng)頸漏斗將0.5g(±0.01g)還原鐵粉送入開(kāi)氏瓶底部，瓶口蓋上小漏斗，轉(zhuǎn)動(dòng)開(kāi)氏瓶，使鐵粉與酸接觸，待劇烈反應(yīng)停止時(shí)（約5min），將開(kāi)氏瓶置于電爐上緩緩加熱45min（瓶?jī)?nèi)土液應(yīng)保持微沸，以不引起大量水分丟失為宜）。停火，待開(kāi)氏瓶冷卻后，通過(guò)長(zhǎng)頸漏斗加加速劑2g和濃硫酸5mL，搖勻。按上述①的步驟，消煮至土液全部變?yōu)辄S綠色，再繼續(xù)消煮1h。消煮完畢，冷卻，待蒸餾。在消煮土樣的同時(shí)，做兩份空白測(cè)定。
（3）氨的蒸餾
①蒸餾前先檢查蒸餾裝置是否漏氣，并通過(guò)水的餾出液將管道洗凈。
②待消煮液冷卻后，用少量無(wú)離子水將消煮液定量地全部轉(zhuǎn)入蒸餾器內(nèi)，并用水洗滌開(kāi)氏瓶4～5次（總用水量不超過(guò)30～35mL）。若用半自動(dòng)式自動(dòng)定氮儀，不需要轉(zhuǎn)移，可直接將消煮管放入定氮儀中蒸餾。
于150mL錐形瓶中，加入2020H2BO3—指示劑混合液5mL（注4），放在冷凝管末端，管口置于硼酸液面以上3～4cm處（注5）。然后向蒸餾室內(nèi)緩緩加入10 mol·L-1NaOH溶液20 mL，通入蒸汽蒸餾，待餾出液體積約50mL時(shí)，即蒸餾完畢。用少量已調(diào)節(jié)至pH 4.5的水洗滌冷凝管的末端。
③用滴定餾出液由藍(lán)綠色至剛變?yōu)榧t色。記錄所用酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積（mL）?？瞻诇y(cè)定所用酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，一般不得超過(guò)0.4mL。
4.2.2.5結(jié)果計(jì)算
土壤全氮（N）量（g·kg-1）=
式中：V——滴定試液時(shí)所用酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積（mL）；
      V0——滴定空白時(shí)所用酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積（mL）；
      c——0.01 mol·L-1（1/2 H2SO4）或HCl標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度；
      14.0——氮原子的摩爾質(zhì)量（g·mol-1）；
      10-3——將mL換算為L(zhǎng)；
      m——烘干土樣的質(zhì)量（g）。
兩次平行測(cè)定結(jié)果允許**相差：土壤全氮量大于1.0 g·kg-1時(shí)，不得超過(guò)0.005%；含氮1.0～0.6 g·kg-1時(shí)，不得超過(guò)0.004%；含氮<0.6 g·kg-1時(shí)，不得超過(guò)0.003%。
注釋：
注1．對(duì)于微量氮的滴定還可以用另一更靈敏的混合指示，即0.099g溴甲酚綠和0.066g甲基紅溶于100mL乙醇中。如要配制成20g·L-1 H2BO3—指示劑溶液：稱取硼酸（分析純）20g溶于約950mL水中，加熱攪動(dòng)直至H2BO3溶解，冷卻后，加入混合指示劑20mL混勻，并用稀酸或稀堿調(diào)節(jié)至紫紅色（pH約5），加水稀釋至1L混勻備用。宜現(xiàn)配。
注2．一般應(yīng)使樣品中含氮量為1.0～2.0mg，如果土壤含氮量在2 g·kg-1以下，應(yīng)稱土樣1g；含氮量在2.0～4.0 g·kg-1者，應(yīng)稱土樣0.5～1.0g；含氮量在4.0g·kg-1以上，應(yīng)稱土樣0.5g。
注3．開(kāi)氏法測(cè)定全氮樣品必須磨細(xì)通過(guò)100孔篩，以使有機(jī)質(zhì)能充分被氧化分解，對(duì)于粘質(zhì)土壤樣品，在消煮前須先加水濕潤(rùn)使土粒和有機(jī)質(zhì)分散，以提高氮的測(cè)定效果。但對(duì)于砂質(zhì)土壤樣品，用水濕潤(rùn)與否并沒(méi)有顯著差別。
注4．硼酸的濃度和用量以能滿足吸收NH3為宜，大致可按每亳升10g·L-1 H2BO3能吸收氮（N）量為0.46mg計(jì)算，例如20 g·L-1 H2BO3溶液5mL*多可吸收的氮（N）量為5×2×0.46=4.6mg。因此，可根據(jù)消煮液中含氮量估計(jì)硼酸的用量，適當(dāng)多加。
注5．在半微量蒸餾中，冷凝管口不必插入硼酸液中，這樣可防止倒吸減少洗滌手續(xù)。但在常量蒸餾中，由于含氮量較高，冷凝管須插入硼酸溶液，以免損失。

4.3.1厭氣培養(yǎng)法

4.3.1.1方法原理  用浸水保溫法（Water-logged incubation）處理土壤（注1），利用嫌氣微生物在一定溫度下礦化土壤有機(jī)氮成為NH4＋—N，再用2mol·L-1 KCl溶液浸提，浸出液中的NH4＋—N，用蒸餾法測(cè)定，從中減去土壤初始礦質(zhì)氮（即原存在于土壤中的NH4＋—N和NO3－—N），得土壤礦化氮含量。

4.3.1.2主要儀器  恒溫生物培養(yǎng)箱、其余儀器同銨態(tài)氮的測(cè)定。

4.3.1.3試劑

（1）0.02 mol·L-1 (1/2H2SO4)標(biāo)準(zhǔn)溶液。先配制0.10 mol·L-1 (1/2H2SO4)溶液，然后標(biāo)定，再準(zhǔn)確稀釋而成。

（2）2.5mol·L-1 KCl  稱取KCl（化學(xué)純）186.4g，溶于水定容1L。

（3）FeSO4—Zn粉還原劑。 將Fe SO4·7H2O（化學(xué)純）50.0g 和Zn粉10.0g共同磨細(xì)（或分別磨細(xì)，分別保存，可數(shù)年不變，用時(shí)按比例混合）通過(guò)60號(hào)篩，盛于棕色瓶中備用（易氧化，只能保存一星期）。

其余試劑同銨態(tài)蒸餾法測(cè)定。

4.3.1.4操作步驟

（1）土壤礦化氮和初始氮之和的測(cè)定。稱取20目風(fēng)干土樣20.0g（注2），置于150mL三角瓶中，加蒸餾水20.0mL，搖勻。要求土樣被水全部覆蓋，加蓋橡皮塞，置于40±2℃恒溫生物培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一星期（七晝夜）取出，加80mL2.5mol·L-1 KCl溶液（注3），再用橡皮塞塞緊，在振蕩機(jī)上振蕩30min，取下立即過(guò)濾于150mL三角瓶中，吸取濾液10.0～20.0mL注入半微量定氮蒸餾器中，用少量水沖洗，先將盛有20g·L-1硼酸—指示劑溶液10.0mL的三角瓶放在冷凝管下，然后再加120g·L-1MgO懸濁液10mL于蒸餾器中，用少量水沖洗，隨后封閉。再通蒸汽，待餾出液約達(dá)40mL時(shí)（約10min），停止蒸餾。取下三角瓶用0.02mol·L-1 (1/2H2SO4)標(biāo)準(zhǔn)液滴定。同時(shí)做空白試驗(yàn)。

（2）壤初始氮的測(cè)定。稱取20目篩的風(fēng)干土樣20.0g，置于250mL三角瓶中，加2mol·L-1 KCl溶液100mL，加塞振蕩30min，過(guò)濾于150mL三角瓶中。

取濾液30～40mL于半微量定氮蒸餾器中，并加入Fe SO4—Zn粉還原劑1.2g，再加400g·L-1NaOH溶液5mL，立即封閉進(jìn)樣口。預(yù)先將盛有20g·L-1硼酸—指示劑10mL的三角瓶置于冷凝管下，再通蒸汽蒸餾，當(dāng)吸收液達(dá)到40mL時(shí)（約10 min）停止蒸餾，取下三角瓶，用0.02mol·L-1 (1/2H2SO4)標(biāo)準(zhǔn)液滴定。同時(shí)做空白試驗(yàn)。

4.3.1.5結(jié)果計(jì)算

土壤礦化氮與初始氮之和（N）（mg·kg-1）=    （1）

土壤初始氮（N）（mg·kg-1）=            （2）

式中： c—— 0.02 mol·L-1 (1/2H2SO4)標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度（mol·L-1）；

V——樣品滴定時(shí)用去1/2H2SO4標(biāo)準(zhǔn)溶液體積（mL）；

V0——空白試驗(yàn)滴定時(shí)用去1/2H2SO4標(biāo)準(zhǔn)溶液體積（mL）； 

ts——分取倍數(shù)；

14.0——氮原子的摩爾質(zhì)量（g·mol-1）；

103——換算系數(shù)。

 

注釋：

注1.據(jù)張守敬博士介紹，臺(tái)灣林家芬等研究認(rèn)為，浸水保溫法和所釋出的礦化氮與肥料效應(yīng)、作物產(chǎn)量等均達(dá)到1%的顯著水準(zhǔn)。

注2.也可以用新鮮土樣測(cè)定礦氮，以心風(fēng)干作用促進(jìn)土壤氮的礦化。

注3.由于原來(lái)培養(yǎng)土壤時(shí)已加水20.0 mL，因此必須提高KCl的濃度，才能使*后KCl的濃度達(dá)到2.0 mol·L-1。

4.3.2好氣培養(yǎng)法

4.3.2.1方法原理  土壤樣品與3倍質(zhì)量的石英砂相混合，用水濕潤(rùn)（注1），將樣品在通氣良好又不損失水分（注2）的條件下恒溫30℃,培養(yǎng)2周。然后用2mol·L-1KCl溶液提取銨態(tài)氮、硝態(tài)氮和亞硝態(tài)氮。取部分提取液再用MgO和戴氏（Devarda）合金同時(shí)進(jìn)行還原和蒸餾，測(cè)定餾出液的銨態(tài)氮量，以此計(jì)算培養(yǎng)后樣品中（NH4＋—N+NO3－—N+ NO2－—N）氮含量。用同樣方法測(cè)定培養(yǎng)前土壤—石英砂混合物中的（NH4＋—N+NO3－—N+ NO2－—N）氮含量，根據(jù)兩次測(cè)定結(jié)果之差，計(jì)算土壤樣品中可礦化氮含量。

4.3.2.2主要儀器   科龍A型半微量定氮蒸餾器、0.01mL刻度的5mL 微量滴定管、RC-16型Res罩（注3）、恒溫生物培養(yǎng)箱。

4.3.2.3試劑

（1）2mol·L-1的KCl溶液。溶解KCl（化學(xué)純、無(wú)氮）1500g于水中，然后稀釋10L，充分?jǐn)噭颉?/span>

（2）氧化鎂（MgO）。MgO（化學(xué)純），放在馬福爐中以600～700℃灼燒2h，取出置于內(nèi)盛粒狀KOH的干燥器中冷卻后，貯于密閉瓶中。

（3）第威德合金（Alloy Devardaˊs），又稱戴氏合金（含Cu50%,含Al45%,含Zn5%），將上等的合金球磨至通過(guò)100目篩，其中至少有76%應(yīng)能通過(guò)300目篩。將磨細(xì)的合金置于密封瓶中貯存。

（4）硼酸—指示劑溶液。同4.2.2.3(4)。

（5）0.005mol·L-1 (1/2H2SO4)標(biāo)準(zhǔn)溶液。量取H2SO4（化學(xué)純）2.83mL，加蒸餾水稀釋至5000mL，然后用標(biāo)準(zhǔn)堿或硼酸標(biāo)定之，此為0.0200mol·L-1 (1/2H2SO4)標(biāo)準(zhǔn)溶液，再將此溶液準(zhǔn)確稀釋4倍，即得0.005mol·L-1 (1/2H2SO4)標(biāo)準(zhǔn)溶液。

4.3.2.4測(cè)定步驟

稱取10.00g（過(guò)2mm篩）風(fēng)干（注4）土樣于100mL燒杯中，再加30.00g經(jīng)酸洗的30～60目的石英砂（注5）充分混勻。然后將混合物移到內(nèi)盛6mL水（注6）的250mL廣口瓶中，在轉(zhuǎn)移時(shí)，應(yīng)將混合物均勻鋪在瓶底上。當(dāng)混合物全部移入廣口瓶后輕輕震動(dòng)瓶子，弄平混合物的表面。在瓶頸上塞上具有中心孔并邊接有Res罩的橡皮塞，將瓶子放在30℃的恒溫生物培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)2周。培養(yǎng)結(jié)束后，除去帶Res罩的橡皮塞，加入2mol·L-1的KCl溶液100mL，用另一只實(shí)心橡皮塞塞緊，放在振蕩機(jī)上振蕩1h。靜置懸濁液直到土壤—砂子混合物沉下，上層溶液清沏（注7）（一般需30min）。此時(shí)可將盛有20g·L-1硼酸—指示劑溶液5mL的三角瓶置于半微量蒸餾器的冷凝管下，冷凝管的末端不必插入硼酸—指示劑溶液中，用20mL移液管吸取上層清液置于科龍A型半微量定氮蒸餾器的進(jìn)樣杯中，并使其很快流入蒸餾瓶中，用洗瓶以少量水沖洗進(jìn)樣杯，然后加入戴氏合金0.2g和MgO0.2g于蒸餾瓶中再用少量水沖洗進(jìn)樣杯，*后加水封閉進(jìn)樣杯。立即通蒸汽蒸餾。當(dāng)餾出液達(dá)到30mL時(shí)，可停止蒸餾，沖洗冷凝管的末端，移出盛蒸餾液的三角瓶，用微量滴定管以0.05 mol·L-1 (1/2H2SO4)標(biāo)準(zhǔn)溶液。同時(shí)做空白試驗(yàn)。

用同法測(cè)定另一份未經(jīng)培養(yǎng)的土壤—石英砂混合物的含氮量。求兩者之差，即為該土壤可礦化氮的含量。

4.3.2.5結(jié)果計(jì)算

同厭氣培養(yǎng)法

注釋

注1．以土壤質(zhì)量計(jì)算加水量，每10g土加水6mL，其結(jié)果是在培養(yǎng)前先將土壤樣品與3倍質(zhì)量的石英砂（30～60孔）混合，則不同土壤在培養(yǎng)期間都能基本達(dá)到氮素*大好氣礦化所需加水分。

注2．水分在土壤氮素礦化時(shí)很重要，配好的水分為土壤氮素礦化的*佳水分含量。培養(yǎng)過(guò)程中只允許通氣而不能損失水分。

注3．Res罩是培養(yǎng)瓶口封用的塑料裝置的商品名稱。這種罩能防止培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)水蒸氣損失，又可保持土壤氮素*大好氣礦化所需的通氣性。這種裝置是一根小塑料管，在其一頭的內(nèi)口焊有一塊薄的能使空氣和呼吸的氣體擴(kuò)散，但水蒸氣冷卻不能通過(guò)的滲透膜。如果沒(méi)有Res罩，可用聚乙烯膜進(jìn)行培養(yǎng)期間通氣，亦能得到重復(fù)性很好的結(jié)果。

注4．這種方法對(duì)于田間濕土也能得到重復(fù)性很好的結(jié)果。當(dāng)用田間濕土進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)，稱取土樣量應(yīng)相當(dāng)于10g風(fēng)干土，加入的水的體積應(yīng)是（6～x）mL，x為培養(yǎng)用的田間濕土樣所含的水量（105℃烘干測(cè)定）。

注5．建筑上用的白色石英砂經(jīng)洗凈和過(guò)篩后可作為培養(yǎng)用的砂子。這種石英砂僅含有極少量NO3－—N+ NO2－—N，粒級(jí)大部分是30～60目的，有時(shí)可能含有少量的銨和水溶性物質(zhì)。但經(jīng)稀酸處理后再用水沖洗，即易于將這些雜質(zhì)去除。*好將過(guò)篩洗凈的砂粒貯于密封的容器內(nèi)。如果將原先無(wú)銨的砂粒置于紙口袋或其他類型的透氣容器中存放幾個(gè)星期以后，就可檢出其中含有相當(dāng)多量的銨。

注6.在這種培養(yǎng)法中，不是用一般的方法來(lái)濕潤(rùn)土壤—砂子混合物的，而是先將水加在培養(yǎng)瓶中，然后再加土壤—砂子混合物，加完后也不進(jìn)行攪拌混合。與一般將水加到土壤—砂子混合物中，而且為了確保水分均勻又加以攪拌混合的方法相比，這種加水方法能得到重復(fù)性較好的結(jié)果。

注7.用2mol·L-1的KCl溶液浸提后，不必過(guò)濾，只要靜置澄清，吸取上層清液進(jìn)行分析即可。用多種土壤所作的試驗(yàn)表明，將培養(yǎng)和未經(jīng)培養(yǎng)的土壤—砂子混合物用2mol·L-1的KCl振蕩提取液的懸濁液貯存1～2天，對(duì)分析結(jié)果無(wú)影響，如果將過(guò)濾后的清液置于冰箱中保存，則可穩(wěn)定幾個(gè)月。不必除去待測(cè)清液中的懸浮物質(zhì)，因其并不影響（NH4＋—N+NO3－—N+ NO2－—N）氮的測(cè)定結(jié)果。

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