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**與**器械**功效鑒定試驗(yàn)
日期：2025-02-22 09:09
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摘要：
**與**器械**功效鑒定試驗(yàn)
2.1.5.1 干熱**柜
2.5.1.1.1 目的
測定干熱**柜(下簡稱**柜)對**芽孢的殺滅效果，以驗(yàn)證其**性能是否符合設(shè)計(jì)規(guī)定。
2.1.5.1.2 試驗(yàn)器材
(1) 枯草桿菌黑色變種( ATCC 9372 )芽孢菌片。染菌載體(10mm × 10mm，以不銹鋼片或玻片為代表，必要時(shí)可隨**對象，增用或改用其他載體)。菌片上**芽孢在160℃±2℃ 條件下，存活時(shí)間 ≥3.9 min，殺滅時(shí)間 ≤19 min，D 值為1.3min～1.9min。
(2) 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基(見：附 A )。
(3) 活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)所需器材(見 2.1.1.2 )。
(4) 使用說明書中規(guī)定**柜可以處理的物品(裝填**柜，使達(dá)滿載要求 )。
(5) 多點(diǎn)溫度測定儀。
2.1.5.1.3 柜內(nèi)溫度測定
將溫度測定儀的多個(gè)探頭，分別放于**柜的各層內(nèi)、中、外不同部位。在柜內(nèi)擺放模擬的常規(guī)處理物品，至使用說明書規(guī)定**時(shí)的*高量(滿載)。關(guān)閉柜門，開啟電源，按**柜設(shè)計(jì)程序進(jìn)行**。每 3min，記錄各點(diǎn)的溫度。試驗(yàn)重復(fù) 3 次，計(jì)算各點(diǎn)不同時(shí)間的平均溫度，并在試驗(yàn)報(bào)告中以圖表列出。
2.1.5.1.4 **試驗(yàn)
(1)根據(jù)試驗(yàn)要求，制備枯草桿菌黑色變種芽孢懸液和芽孢樣片。
(2) 每次試驗(yàn)取 2個(gè)菌片為一組，平放于無菌平皿內(nèi)，勿重疊。加蓋，分置于**柜的各層，內(nèi)、中、外不同部位。試驗(yàn)時(shí)，**柜內(nèi)**片樣本外，還應(yīng)滿載以模擬的常規(guī)處理物品。
(3)關(guān)閉柜門，開啟電源，按**柜設(shè)計(jì)程序進(jìn)行**。**完畢，取出平皿，將菌片取出接種于含 5.0ml 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基試管中，置 37℃培養(yǎng)箱內(nèi)作定性培養(yǎng)。72h 后觀察結(jié)果。
肉湯管混濁者表示有菌生長，判為陽性;肉湯管澄清者表示無菌生長，繼續(xù)培養(yǎng)至第 7d，若仍無菌生長，判為陰性。
對難以判定的肉湯管，取其中 0.2ml 懸液接種營養(yǎng)瓊脂平板，用**L 棒涂抹勻，置37℃ 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。48 h后涂片染色，在顯微鏡下觀察菌落形態(tài)，或進(jìn)一步做其他試驗(yàn)，以判斷生長者是否為試驗(yàn)菌。若有非試驗(yàn)菌污染，應(yīng)查找原因重新進(jìn)行試驗(yàn)。
(4)測試中，應(yīng)同時(shí)設(shè)立定性和定量陽性對照組(菌片對照)與陰性對照組(培養(yǎng)基對照)。
(5) 定量陽性對照組，以同批試驗(yàn)用菌片放在室溫下，待試驗(yàn)組**接種后，立即將該菌片 2 片分別移入含 5.0mlPBS試管中，各振蕩80次洗滌。按 2.1.1.3 所示方法進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。
(6)定性陽性對照組，以同批試驗(yàn)用菌片放在室溫下，待試驗(yàn)組**接種后，立即將試驗(yàn)菌片 2 片，分別接種于 5.0ml營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，放入培養(yǎng)箱中作定性培養(yǎng)，觀察**生長情況。
(7) 陰性對照組，以空白樣片 2 片，分別接種于 5.0ml營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，同時(shí)將未接種過的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基放入培養(yǎng)箱中作定性培養(yǎng)，觀察有無**生長。
(8) 試驗(yàn)重復(fù) 5 次。
(9) 在 5次試驗(yàn)中，每次試驗(yàn)中陽性對照菌片的回收菌量均應(yīng)達(dá)5×105cfu/片～5×106cfu/片；定性陽性對照組，**生長良好；陰性對照應(yīng)無菌生長。陽性或陰性對照若有不符合上述要求的結(jié)果，試驗(yàn)作廢，重新進(jìn)行。
2.1.5.1.5 評價(jià)規(guī)定
(1) 在 3次測定溫度的試驗(yàn)中，各點(diǎn)平均溫度均達(dá)設(shè)計(jì)要求。
(2) 在 5 次**試驗(yàn)中，各次試驗(yàn)定量陽性對照的回收菌量均達(dá)5×105cfu/片～5×106cfu/片；定性陽性對照組，**生長良好；陰性對照組樣本應(yīng)無菌生長。所有試驗(yàn)菌片均無**生長時(shí)，可判為干熱**合格。
2.1.5.1.6 注意事項(xiàng)
(1)干熱**效果檢測，應(yīng)使用枯草桿菌黑色變種芽孢，不得使用嗜熱脂肪桿菌芽孢，因在干熱條件下，前者對干熱的抗力較后者為強(qiáng)。
(2)**柜柜室容積和加熱裝置的變化，均可影響**效果，故在這方面的設(shè)計(jì)有所變動時(shí)，**效果應(yīng)重新測定。
(3)**效果觀察，樣本檢測稍有污染即可將**成功的結(jié)果全部否定，故試驗(yàn)時(shí)必須注意防止環(huán)境的污染和嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作技術(shù)規(guī)定。
(4)柜室內(nèi)滿載與非滿載，結(jié)果差別較大，故正式試驗(yàn)時(shí)必須在滿載條件下進(jìn)行。
2.1.5.2 紅外線**碗柜
2.1.5.2.1 目的
檢測紅外線**碗柜 (下簡稱**碗柜)對餐(飲)具的**效果，以驗(yàn)證其殺滅微生物性能是否符合設(shè)計(jì)規(guī)定。
2.1.5.2.2 試驗(yàn)器材
(1) 大腸桿菌( 8099 )懸液。
(1) 脊髓灰質(zhì)炎病毒懸液。
(2) 染菌玻片( 10mm×10mm)載體（必要時(shí)可隨**對象，增用或改用其他載體）
(4) 活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)所需器材(見 2.1.1.3 )。
(5) 病毒滅活試驗(yàn)所需試液、培養(yǎng)基與器材(見 2.1.1.10)。
(6)食(飲)具(種類與數(shù)量按使用說明書規(guī)定，用于裝填**碗柜進(jìn)行滿載試驗(yàn))
(7) 多點(diǎn)溫度測定儀
2.1.5.2.3 柜內(nèi)溫度測定
將溫度測定儀的多個(gè)探頭，分別放于**碗柜每層的內(nèi)、外兩點(diǎn)(大型碗柜可在內(nèi)、中、外3點(diǎn)放置)，擺放食(飲)具至使用說明書規(guī)定的*高裝載量(滿載)。關(guān)閉柜門，開啟電源，按**碗柜規(guī)定程序進(jìn)行**。每 3min，記錄各點(diǎn)的溫度。試驗(yàn)重復(fù) 3 次，計(jì)算各點(diǎn)不同時(shí)間的平均溫度，并以表列出。
2.1.5.2.4 大腸桿菌殺滅試驗(yàn)
(1) 按 2.1.1.2所示方法制備大腸桿菌菌片(載體為玻片)。
(2)在**碗柜滿載的情況下，將干燥大腸桿菌菌片置無菌平皿內(nèi)，每平皿放 2片，勿重疊。在**碗柜每層的內(nèi)、外兩個(gè)點(diǎn)各放一含菌片的平皿(大型碗柜可在內(nèi)、中、外各放一平皿)，打開平皿蓋。
(3) 關(guān)閉柜門，開啟電源，按**碗柜原設(shè)計(jì)程序進(jìn)行**。**完畢，按說明書規(guī)定的時(shí)間打開柜門，取出平皿。將菌片移入含 5ml PBS試管內(nèi)，按 2.1.1.3 所示方法進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。
(4)在上述**試驗(yàn)時(shí)，將未**菌片，放置室溫下，當(dāng)**組試驗(yàn)完畢后，取該菌片進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)，作為陽性對照。另將同批培養(yǎng)基與 PBS等培養(yǎng)，作為陰性對照 。
(5) 試驗(yàn)重復(fù) 3 次，其平均殺滅率應(yīng)按 2.1.1.7的規(guī)定進(jìn)行計(jì)算和表達(dá)。
(6) 在 3次試驗(yàn)中，每次陽性對照回收菌數(shù)均達(dá)5×105cfu/片～5×106cfu/片，陰性對照無菌生長，陽性和陰性對照組結(jié)果若不符上述要求，試驗(yàn)作廢，重新進(jìn)行。
2.1.5.2.5 脊髓灰質(zhì)炎病毒滅活試驗(yàn)
(1) 按 2.1.1.10.3所示方法制備脊髓灰質(zhì)炎病毒懸液。若無特殊要求，用玻片為載體。
(2)在**碗柜滿載的情況下，將干燥的染有脊髓灰質(zhì)炎病毒的載體置無菌平皿內(nèi)，每平皿放 2片，勿重疊。在**碗柜每層的內(nèi)、外兩個(gè)點(diǎn)各放一含染有脊髓灰質(zhì)炎病毒載體的平皿(大型碗柜可在內(nèi)、中、外各放一平皿)，打開平皿蓋。
(3)關(guān)閉柜門，開啟電源，按原規(guī)定程序進(jìn)行**。**完畢，按說明書規(guī)定的時(shí)間，打開柜門，取出平皿。將載體移入含 1ml細(xì)胞維持液的試管中。振蕩洗滌后，取樣按 2.1.1.10.4 所示方法檢測殘留脊髓灰質(zhì)炎病毒的感染滴度。
（4）陽性對照，將未**的染有脊髓灰質(zhì)炎病毒的載體 2 片，放置于**碗柜外室溫下。待試驗(yàn)組**完畢后，立即將載體移入含 1ml細(xì)胞維持液的試管中。振打后，取樣按 2.1.1.10.4所示方法檢測殘留脊髓灰質(zhì)炎病毒的感染滴度。脊髓灰質(zhì)炎病毒的感染滴度應(yīng)≥105TCID50。
（5）陰性對照，用不含脊髓灰質(zhì)炎病毒的完全培養(yǎng)基作為陰性對照，以觀察培養(yǎng)基無污染，細(xì)胞是否生長良好。
(6) 試驗(yàn)重復(fù) 3 次。
(7) 根據(jù)各組的平均病毒感染滴度（TCID50），分別計(jì)算其對病毒的滅活指數(shù)，病毒的滅活指數(shù)應(yīng)達(dá) 4 個(gè)對數(shù)值。
2.1.5.2.6 評價(jià)規(guī)定
對**碗柜實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)所得**效果的評價(jià)，應(yīng)以對微生物的殺滅效果為準(zhǔn)。當(dāng)所測結(jié)果均達(dá)到以下要求者可判為合格：
(1) 柜內(nèi)*低溫度點(diǎn)達(dá)到 120℃，并可持續(xù) 15min以上。
(2)對大腸桿菌，每次試驗(yàn)，陽性對照組回收菌數(shù)均達(dá)5×105cfu/片～5×106cfu/片，陰性對照無菌生長，對大腸桿菌的殺滅對數(shù)值，各點(diǎn)均≥3.00為**合格。
(3) 對脊髓灰質(zhì)炎病毒，每次試驗(yàn)，培養(yǎng)基無污染，細(xì)胞生長良好。脊髓灰質(zhì)炎病毒感染滴度（TCID50）≥105，滅活對數(shù)值≥ 4.00。可判為**合格。
2.1.5.2.7 注意事項(xiàng)
(1)**碗柜內(nèi)滿載與非滿載，結(jié)果可有相當(dāng)大差別，故正式試驗(yàn)必須在滿載條件下進(jìn)行。
(2)不同大小的**碗柜，柜內(nèi)裝有紅外線燈的功率或安裝支數(shù)，均可影響**效果，故在這方面的設(shè)計(jì)有所變動時(shí)，應(yīng)重新測定。
(3) 大腸桿菌殺滅試驗(yàn)注意事項(xiàng)見 2.1.1.7。
(4) 脊髓灰質(zhì)炎病毒滅活試驗(yàn)注意事項(xiàng)見2.1.1.10。
2.1.5.3 微波**柜
2.1.5.3.1 目的
測定微波**柜（下簡稱**柜）對微生物的殺滅效果，以驗(yàn)證其**或**性能是否符合原設(shè)計(jì)規(guī)定。
2.1.5.3.2 試驗(yàn)器材
(1) 金黃色葡萄球菌( ATCC 6538 )、大腸桿菌( 8099)、銅綠假單胞菌（ ATCC 15442 ）、龜分枝桿菌（ATCC93326）、枯草桿菌黑色變種( ATCC 9372)芽孢等**或芽孢懸液。
(2) 染菌載體( 10mm×10mm，以布片或玻片為代表，必要時(shí)可隨**對象，增用或改用其他載體)。
(3) 微波漏能測試儀(檢測**柜微波有無泄漏)。
(4) 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基：見附錄A。
(3) 活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)所用器材(見 2.1.1.2 )。
(5) 使用說明書中規(guī)定的處理的物品(裝填**柜，使達(dá)滿載)。
2.1.5.3.3**及其芽孢和**殺滅試驗(yàn)操作程序
（1）按 2.1.1.2所示相關(guān)方法制備試驗(yàn)用**及其芽孢和**菌片。若無特殊要求，菌片以布片為載體( 10mm×10mm)。每一牛皮紙小袋裝2個(gè)菌片。
（2）按實(shí)用情況，在**柜內(nèi)模擬擺放常規(guī)處理物品至使用說明書中規(guī)定的*高裝載量(滿載)。將試驗(yàn)菌片放于柜室各層中央和四角的物品中間，每層共放置 5袋。放入試驗(yàn)菌片前，按使用方法，做預(yù)濕處理。柜室容量小者可適當(dāng)減少放置菌片數(shù)量。
（3）菌片布放完以后，關(guān)閉柜門，進(jìn)行微波照射。至預(yù)定時(shí)間，停止照射，打開柜門，取出物品和試驗(yàn)菌片。
（4）**試驗(yàn)時(shí)，按 2.1.1.7要求的方法，作定量**效果的檢測。**試驗(yàn)時(shí)，將取出的試驗(yàn)菌片移種于營養(yǎng)肉湯中，置溫箱內(nèi)作定性培養(yǎng)( 37℃ )。培養(yǎng)7d，若仍無菌生長，判為陰性。對難以判斷的肉湯管，取其中 0.2 ml 懸液接種營養(yǎng)瓊脂平板，用** L 棒涂勻，置 37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)。48 h后涂片染色顯微鏡下觀察菌落形態(tài)，或進(jìn)一步做其他試驗(yàn)，判斷生長的是否為試驗(yàn)菌。若為非試驗(yàn)菌，應(yīng)重新進(jìn)行試驗(yàn)。
（5）測試中，應(yīng)同時(shí)設(shè)立定性和定量陽性對照組(菌片對照)與陰性對照組(培養(yǎng)基對照)。
（6）定量陽性對照組，將同批試驗(yàn)用的菌片放在室溫下，待**或**試驗(yàn)組達(dá)規(guī)定作用時(shí)間后，立即將該菌片 2 片分別移入含 5.0mlPBS 試管中，各振蕩 80次。取洗液按 2.1.1.3 所示方法進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。
（7）定性陽性對照組，將同批試驗(yàn)用的菌片放在室溫下，待**試驗(yàn)組達(dá)規(guī)定作用時(shí)間后，立即將該批試驗(yàn)用的菌片 2 片，分別接種于5.0ml 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，放入培養(yǎng)箱中作定性培養(yǎng)，觀察**生長情況。
（8）陰性對照組，在**試驗(yàn)中，將同批試驗(yàn)用的菌片 2 片，分別接種于 5.0ml營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，同時(shí)將未接種過的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基放入培養(yǎng)箱中作定性培養(yǎng)，觀察有無**生長。在**試驗(yàn)中，則應(yīng)對所用中和劑、稀釋液和培養(yǎng)基進(jìn)行無菌檢測，觀察有無**污染。
（9）試驗(yàn)重復(fù)5次。
（10）在5次試驗(yàn)中，陽性對照組各次試驗(yàn)樣片的回收菌量均應(yīng)在5×105cfu/片～5×106cfu/片；定性陽性對照組，**生長良好；陰性對照組樣本應(yīng)無菌生長。陽性或陰性對照若有不符合上述要求的結(jié)果，試驗(yàn)作廢，重新進(jìn)行。
2.1.5.3.4 評價(jià)規(guī)定
（1）在5次**試驗(yàn)中，每次試驗(yàn)中的陽性對照菌片，檢測回收菌量均應(yīng)達(dá)5×105cfu/片～5 × 106cfu/ 片，陰性對照組應(yīng)無菌生長，各次試驗(yàn)的殺滅對數(shù)值均≥3.00?？膳袨?*合格。
（2）在5次**試驗(yàn)中，每次試驗(yàn)中的定量陽性對照組，檢測回收菌量均達(dá)5×105cfu/片～5×106cfu/片；定性陽性對照組，**生長良好。陰性對照組樣本應(yīng)無菌生長。所有試驗(yàn)菌片都無**生長時(shí)，可判為**合格。
2.1.5.3.5 注意事項(xiàng)
(1)微波強(qiáng)弱受電壓影響很大。試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)注意電壓是否符合說明書規(guī)定值。波動較大時(shí)，應(yīng)使用穩(wěn)壓電源。
(2)**柜在**棉織品、金屬、橡膠管等物品時(shí)，一定事先摸索被**物品適宜的預(yù)濕水量，一方面可防止棉織品燒焦，金屬物品對磁控管的破壞；一方面可提高其**效果。
(3)微波**效果與樣本的含水量密切有關(guān)。在使用中規(guī)定需預(yù)濕者，試驗(yàn)時(shí)亦必須預(yù)濕，不可省略。
(4)微波**金屬物品時(shí)，需用濕布將其包裹，特別是對金屬器械的**部分，以防因尖端放電損壞磁控管。
(5)測試人員長時(shí)間受微波照射，對健康有害。試驗(yàn)時(shí)必須穿戴專用的防護(hù)用具。測試的**柜應(yīng)先用微波漏能測試儀檢測有無微波泄漏。
2.1.5.4 紫外線燈
2.1.5.4.1 目的
測定紫外線燈(包括雙燈管組合燈具)輻照強(qiáng)度及對微生物的殺滅作用，以驗(yàn)證其**性能是否達(dá)到合格標(biāo)準(zhǔn)。
2.1.5.4.2 試驗(yàn)器材
(1) 金黃色葡萄球菌( ATCC 6538 )、大腸桿菌( 8099)、銅綠假單胞菌（ ATCC 15442 ）、枯草桿菌黑色變種( ATCC 9372)芽孢、白色葡萄球菌（8032，空氣**時(shí)用）、等**及其芽孢和**懸液。
(2) 染菌載體( 10mm×10mm，以玻片為代表，必要時(shí)可隨**對象，增用或改用其他載體)。
(3) 紫外線照度計(jì)(在計(jì)量標(biāo)定有效期內(nèi)，下簡稱照度計(jì))。
(4) 紫外線燈測定架(測定時(shí)，紫外線燈固定于測定架頂端。頂端高 2m，可上下移動。下簡稱測定架)。
(5) 穩(wěn)壓器( 220V )
（6）**及其芽孢和**殺滅試驗(yàn)所需器材(見 2.1.1.7，2.1.1.9 )。
2.1.5.4.3 輻照強(qiáng)度測定
(1) 將待測紫外線燈管固定于測定架，調(diào)節(jié)距離使燈管距其下方垂直中心放置照度計(jì)處1m。
(2) 開啟紫外線燈 5min 后，用照度計(jì)在燈管下方垂直距離 1m的中心處測量其輻照度值 ( μW/cm2 )。
(3) 測量時(shí)，電壓應(yīng)穩(wěn)定在 220V。
(4) 普通型或低臭氧型直管紫外線燈( 30W )，在燈管下方垂直1m 的中心 處，新燈管的輻照度值應(yīng)≥90μW/cm2。
(5)使用中的燈管，可在原裝置處進(jìn)行測定。測定位置仍在燈管下方垂直距離1m的中心處。使用中燈管的輻照度值應(yīng)≥70μW/cm2，低于此值者應(yīng)予更換。
(6) 多燈管組合燈具的測定方法和合格標(biāo)準(zhǔn)，同單支燈管。
(7) 對異型(非直管型)、高強(qiáng)度型，或非 30W功率等燈管的檢測距離和輻照度值合格標(biāo)準(zhǔn)，隨產(chǎn)品用途和使用方法而定。原則上，應(yīng)不低于產(chǎn)品使用說明書注明的輻照度值，并按其推薦劑量[即輻照度值乘以照射時(shí)間(s)]進(jìn)行**試驗(yàn)，證明能滿足應(yīng)用所需效果者可判為實(shí)驗(yàn)室測試合格。
(8) 輻照強(qiáng)度檢測，每次鑒定抽查 10 支燈管，每支燈管重復(fù)測定 3次。各次數(shù)據(jù)均達(dá)標(biāo)準(zhǔn)可判輻照強(qiáng)度合格。
2.1.5.4.4**及其芽孢和**殺滅效果的測定
(1) 按 2.1.1.2所示方法制備**及其芽孢和**菌片。菌片以玻片為載體。
(2) 試驗(yàn)時(shí)，確定菌片照射位置。若無特殊要求，30 W 燈管應(yīng)在燈管下方垂直距離 1 m 的中心處。
(3) 將菌片平置于無菌平皿中，勿重疊。平皿放于測定架預(yù)先確定的照射位置上進(jìn)行照射。
(4) 照射分為 3個(gè)時(shí)間組。各組時(shí)間的設(shè)置應(yīng)使能測出將試驗(yàn)**及其芽孢和**殺滅對數(shù)值≥3.00所需的*低劑量，否則應(yīng)調(diào)整時(shí)間，重新試驗(yàn)，直至取得所需結(jié)果為止。
(5) 將照射后樣本送實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)(見 2.1.1.2)的測定。
(6) 測試中，應(yīng)同時(shí)設(shè)立陽性對照組(菌片對照)與陰性對照組(培養(yǎng)基對照)。
(7) 陽性對照組，以試驗(yàn)用的同批菌片置室溫下，待試驗(yàn)組**完畢后，立即將該批菌片 2 片分別放入含 5.0ml PBS試管中，電動混勻器震蕩20s或各振敲 80次。取洗液按 2.1.1.2 所示方法進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。
(8) 陰性對照組，以同次實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基或 PBS接種培養(yǎng)基培養(yǎng)，觀察有無**生長。
(9)試驗(yàn)重3次。每次試驗(yàn)中的陽性對照菌片，檢測回收菌量均應(yīng)在5×105cfu/片～5×106cfu/片，陰性對照組應(yīng)無菌生長，各次試驗(yàn)對**及其芽孢和**的殺滅對數(shù)值均≥3.00。該照射時(shí)間可判為**合格所需照射的時(shí)間。陽性或陰性對照組結(jié)果若不符上述要求，該次試驗(yàn)作廢，重新進(jìn)行。
(10) 對異型(非直管型)、高強(qiáng)度型，或非 30W 功率等燈管的照射距離，隨產(chǎn)品用途和使用方法而定。
2.1.5.4.5評價(jià)規(guī)定
在3次**試驗(yàn)中，對**及其芽孢和**，每次試驗(yàn)中的陽性對照菌片，檢測回收菌量均應(yīng)達(dá)5 × 105cfu/片～5× 106cfu/ 片，陰性對照應(yīng)無菌生長，各次試驗(yàn)的殺滅對數(shù)值均≥3?？膳袨?*合格。
2.1.5.4.6 臭氧產(chǎn)生量的測定
紫外線燈產(chǎn)生的臭氧量不同可影響**效果和使用的**，故應(yīng)測定臭氧濃度以便進(jìn)行綜合考慮。臭氧濃度測定方法見本規(guī)范理化鑒定技術(shù)。檢測條件應(yīng)以產(chǎn)品使用說明中規(guī)定的使用方法、面積(或容積)和時(shí)間為準(zhǔn)，進(jìn)行現(xiàn)場(或模擬現(xiàn)場)測定。臭氧濃度應(yīng)寫明于使用說明書中，低臭氧紫外線燈產(chǎn)生的臭氧濃度，應(yīng)不超過國家規(guī)定的工作場所**濃度(0.3mg/m3 )。
2.1.5.4.7 有效使用期的測定
將燈管裝設(shè)于測試架上，通電連續(xù)照射。每周測試一次輻照度值，直至低于70μW/cm2 時(shí)為止。該樣本連續(xù)照射的時(shí)間 ( h )，即為其有效使用時(shí)間 ( h )。隨機(jī)抽樣，重復(fù)測試5 支燈管，取其*低值。
2.1.5.4.8 注意事項(xiàng)
(1)測試前應(yīng)先用酒精棉球擦除燈管上的灰塵和油垢，以免影響紫外線的照射強(qiáng)度。
(2)**試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)使紫外線直接照射擬**表面，否則不能反映該劑量真實(shí)的**效果。
(3)在紫外線燈下工作時(shí)，勿直視燈管，并穿戴防護(hù)眼鏡、防護(hù)服、手套等，以減少對測試人員的傷害。在有人工作環(huán)境中，空氣中臭氧濃度不得超過0.3mg/m3。
(4)測定輻照度值或進(jìn)行**試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)保持室內(nèi)潔凈無塵。
2.1.5.5 紫外線**箱
2.1.5.5.1 目的
測定紫外線**箱(下簡稱**箱)對物體表面微生物的殺滅效果，以驗(yàn)證其**性能是否符合原設(shè)計(jì)規(guī)定。
2.1.5.5.2 試驗(yàn)器材
（1）金黃色葡萄球菌( ATCC 6538 )、大腸桿菌( 8099 )、銅綠假單胞菌（ ATCC 15442 ）、枯草桿菌黑色變種(ATCC 9372 )芽孢、白色***( ATCC 10231)、龜分枝桿菌膿腫亞種（ATCC93326）等懸液和脊髓灰質(zhì)炎病毒懸液。
（2）染菌載體( 10mm × 10mm，以玻片為代表，必要時(shí)可隨**對象，增用或改用其他載體)。
（3）紫外線照度計(jì)(在計(jì)量標(biāo)定有效期內(nèi)，下簡稱照度計(jì))。
（4）紫外線燈測定架[見 2.1.5.4.2(3)]
（5）**及其芽孢、龜分枝桿菌和**殺滅試驗(yàn)所需器材(見2.1.1.7，2.1.1.8，2.1.1.9)。
（6）脊髓灰質(zhì)炎病毒滅活試驗(yàn)所需試液、培養(yǎng)基和器材（見2.1.1.10）
（7）使用說明書中規(guī)定**箱可處理的物品(裝放于**箱，使達(dá)滿載要求)。
2.1.5.5.3 紫外線照射強(qiáng)度測定
打開**箱的蓋或門，將內(nèi)裝紫外線燈管取下，在紫外線燈測定架上按 2.1.6.4測定其照射強(qiáng)度的輻照度值，以確定是否與產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)或企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的相同。必要時(shí)，以與箱門(或蓋)一樣大小的鋁板，用膠帶固定于**箱的門框(或**箱蓋)上。鋁板中央處鉆一直徑為 15mm 小圓孔，開啟箱內(nèi)紫外線燈，照射5min，待穩(wěn)定后，通過鋁板上小圓孔用照度計(jì)測定射出紫外線的輻照度值( μW/cm2 )。
2.1.5.5.4對微生物殺滅效果的測定
（1）**及其芽孢、龜分枝桿菌和**殺滅效果的測定
①按 2.1.1.2 所示相關(guān)方法制備**及其芽孢和**菌片。菌片以玻片為載體。
②每次試驗(yàn)只測試一種微生物，以防交叉污染。試驗(yàn)用樣片每 2片為一組，平放于無菌平皿中，勿重疊。箱內(nèi)容積過小時(shí)，可將試驗(yàn)**及其芽孢和**直接涂染于所設(shè)計(jì)**的物品表面進(jìn)行試驗(yàn)，每 2件為一組。
③根據(jù)**箱容積的大小，放入一定數(shù)量裝有樣片的平皿，或直接涂染的樣本，但**箱內(nèi)應(yīng)同時(shí)將所設(shè)計(jì)**的物品擺放至使用說明書中規(guī)定的*高裝載量(滿載)。
④關(guān)閉**箱門(或蓋)，打開紫外線燈，照射至規(guī)定時(shí)間。
⑤取出樣本，按 2.1.1.3所示方法進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)。對白色***的殺滅試驗(yàn)，用沙堡瓊脂培養(yǎng)基，對黑曲霉菌的殺滅試驗(yàn)，用胰蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基，其他方法和步驟均與**殺滅試驗(yàn)相同。
⑥陽性對照組，以試驗(yàn)用的同批菌片置室溫下，待試驗(yàn)組菌片**達(dá)規(guī)定作用時(shí)間后，立即將該批菌片 2 片分別放入含 5.0ml PBS試管中，各振蕩 80 下。取樣液按 2.1.1.3 所示方法進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。
⑦陰性對照組，用同批次試驗(yàn)用培養(yǎng)基或 PBS接種培養(yǎng)基培養(yǎng)，觀察有無**生長。
⑧試驗(yàn)重復(fù)3次。陽性對照菌片每次試驗(yàn)回收的含菌量均應(yīng)在5×105cfu/片～5×106cfu/片，陰性對照組樣本應(yīng)無菌生長，各次試驗(yàn)對**及其芽孢和**的殺滅對數(shù)值均≥3.00。該照射時(shí)間可判為**合格所需照射的時(shí)間。陽性或陰性對照組結(jié)果若不符上述要求，該次試驗(yàn)作廢，重新進(jìn)行。
（2）脊髓灰質(zhì)炎病毒滅活試驗(yàn)
①按 2.1.1.10.3 所示方法制備脊髓灰質(zhì)炎病毒懸液。若無特殊要求，用玻片為載體。
②每次試驗(yàn)2片脊髓灰質(zhì)炎病毒樣片為一組，平放于無菌平皿中，勿重疊。箱內(nèi)容積過小時(shí)，可將脊髓灰質(zhì)炎病毒直接涂染于所設(shè)計(jì)**的物品表面進(jìn)行試驗(yàn)，每2件為一組。
③根據(jù)**箱容積的大小，放入一定數(shù)量裝有樣片的平皿，或直接涂染的樣本，但**箱箱內(nèi)應(yīng)同時(shí)將所設(shè)計(jì)**的物品擺放至使用說明書中規(guī)定的*高裝載量(滿載)。
④關(guān)閉**箱的門(或蓋)，打開紫外線燈，照射至規(guī)定時(shí)間。
⑤將照射后將脊髓灰質(zhì)炎病毒樣片移入含 1ml 細(xì)胞維持液的試管中。振打后，取樣按 2.1.1.10所示方法檢測殘留脊髓灰質(zhì)炎病毒的滴度。
⑥將未**的脊髓灰質(zhì)炎病毒樣片2片，放置于**箱外室溫下。待試驗(yàn)組**完畢后，立即將脊髓灰質(zhì)炎病毒樣片移入含1ml細(xì)胞維持液的試管中。振蕩后，取樣按 2.1.1.10.4 所示方法檢測殘留脊髓灰質(zhì)炎病毒的感染滴度，作為陽性對照。
⑦陰性對照，用不含脊髓灰質(zhì)炎病毒的完全培養(yǎng)基作為陰性對照，以觀察培養(yǎng)基有無污染，細(xì)胞是否生長良好。
⑧試驗(yàn)重復(fù)3次。
⑨根據(jù)各組的平均病毒的感染滴度（TCID50 ），分別計(jì)算其對病毒的滅活對數(shù)值。
（3）評價(jià)規(guī)定
在3次**試驗(yàn)中，對**及其芽孢和**，每次試驗(yàn)中的陽性對照菌片，檢測回收菌量均應(yīng)達(dá) 5 × 105cfu/片～5 × 106 cfu/片，陰性對照組樣本應(yīng)無菌生長，各次試驗(yàn)的殺滅對數(shù)值均≥3.00。對脊髓灰質(zhì)炎病毒，培養(yǎng)基無污染，細(xì)胞生長良好，脊髓灰質(zhì)炎病毒的感染滴度（TCID50 ）≥105，滅活對數(shù)值≥4.00?？膳袨?*合格。
2.1.5.5.5 注意事項(xiàng)
(1)試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)注意箱內(nèi)物品有無未被紫外線直接照到處(如被箱內(nèi)支架遮擋)。如實(shí)用中擬**物品有可能處于該位置，在染菌樣片布點(diǎn)時(shí)應(yīng)考慮觀察該部位的**效果。
(2) 其他同2.1.5.4.6。
2.1.5.6 環(huán)氧乙烷**器
2.1.5.6.1 目的
測定環(huán)氧乙烷**器 (下簡稱**器)對**芽孢的殺滅能力，以驗(yàn)證其**性能是否符合原設(shè)計(jì)規(guī)定。
2.1.5.6.2 試驗(yàn)器材
(1) 枯草桿菌黑色變種( ATCC 9372 )芽孢菌片。
含菌量要求為 5 ×105cfu/片～ 5 ×106cfu/片(按活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)結(jié)果計(jì))。在環(huán)氧乙烷量為 600mg/L±30mg/L，溫度為54℃±2℃，相對濕度為 60%±10% 條件下，菌片上芽孢存活時(shí)間應(yīng)≥7.8min，殺滅時(shí)間≤58min，D值為2.6min～5.8min。
(2) 染菌載體( 10mm × 10mm，以布片為代表，必要時(shí)可隨**對象，增用或改用其他載體。
(3) 聚乙烯塑料袋( 封裝菌片用，大小為 60mm × 40mm，厚 0.2min～0.4mm )。
(4) 活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)所需器材(見 2.1.1.3 )。
(5)使用說明書中規(guī)定**器可處理的物品(裝填**器，使達(dá)滿載要求)。
2.1.5.6.3 **試驗(yàn)操作程序
(1)根據(jù)試驗(yàn)要求，制備枯草桿菌黑色變種芽孢懸液和菌片。菌片放入雙層聚乙烯塑料袋內(nèi)密封包裝，每袋2片。每次試驗(yàn)用20袋。
(2)將**器上、中、下3層，每層內(nèi)、中、外各設(shè)一點(diǎn)，共設(shè)9點(diǎn)。每點(diǎn)物品中間布放1袋，共需18袋試驗(yàn)菌片。另將一袋（2片）菌片放置在室溫條件下作為陽性對照。
(3)按使用說明書所規(guī)定的環(huán)氧乙烷濃度、作用時(shí)間、柜內(nèi)的溫度和相對濕度，在滿載條件下進(jìn)行環(huán)氧乙烷**處理。滿載用物品，隨**器用途而定。處理完畢，取出菌片，分別移種于5ml 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，置37℃ 培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，7d后觀察*終結(jié)果(定性培養(yǎng)檢測)。
對難以判斷結(jié)果的營養(yǎng)肉湯管，取其中0.2ml懸液接種營養(yǎng)瓊脂平板，用無菌L棒涂抹均勻，置37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。48h后涂片染色，顯微鏡下觀察菌落形態(tài)，或進(jìn)一步做其他試驗(yàn)，判斷有無生長或生長的是否為試驗(yàn)菌。若為非試驗(yàn)菌，則應(yīng)重新進(jìn)行試驗(yàn)。
(4)測試中，應(yīng)同時(shí)設(shè)立定性和定量陽性對照組與陰性對照組。
(5) 定量陽性對照組，以同批試驗(yàn)用菌片置室溫下，待**或**試驗(yàn)組達(dá)規(guī)定作用時(shí)間后，立即將該菌片2片分別放入含5.0mlPBS試管中，各振敲打80次。取洗液按2.1.1.3 所示方法進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。
(6)定性陽性對照組，以同批試驗(yàn)用菌片置室溫下，待**試驗(yàn)組達(dá)規(guī)定作用時(shí)間后，立即將該菌片 2 片，分別接種于 5.0ml營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，放入溫箱中作定性培養(yǎng)，觀察有**生長情況。
(7) 陰性對照組，以同批次試驗(yàn)用未染菌樣片 2 片，分別接種于 5.0ml營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，同時(shí)將未接種過的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基放入培養(yǎng)箱中作定性培養(yǎng)，觀察有無**生長。
(8) 試驗(yàn)重復(fù) 5 次。
(9)在5次試驗(yàn)中，每次試驗(yàn)中的陽性對照菌片，回收菌量均應(yīng)在5×105cfu/片～5×106cfu/片；定性陽性對照組，**生長良好；陰性對照應(yīng)無菌生長。陽性或陰性對照若有不符合上述要求的結(jié)果，試驗(yàn)作廢，重新進(jìn)行。
2.1.5.6.5 評價(jià)規(guī)定
在 5 次**試驗(yàn)中，每次試驗(yàn)中的定量陽性對照組，檢測回收菌量均達(dá) 5× 105 cfu/ 片～5 × 106cfu/ 片；定性陽性對照組，**生長良好。陰性對照應(yīng)無菌生長。所有試驗(yàn)菌片全部無**生長時(shí)，可判為**合格。
2.1.5.6.6 注意事項(xiàng)
(1)溫度和相對濕度對環(huán)氧乙烷氣體**效果影響較大，故應(yīng)嚴(yán)格控制試驗(yàn)中的有關(guān)條件。
(2)環(huán)氧乙烷液體可溶解聚乙烯、聚氯乙烯等，不可將其液體滴落于此類物品上。環(huán)氧乙烷不論液體或氣體，均可損壞賽璐璐制品，試驗(yàn)時(shí)應(yīng)予注意。
(3)環(huán)氧乙烷易燃易爆，操作現(xiàn)場應(yīng)采取防火防爆措施，不得有明火作業(yè)及電火花發(fā)生。
(4)吸入過多環(huán)氧乙烷氣體，可引起**，嘔吐等中毒癥狀，嚴(yán)重者可致肺水腫等。工作環(huán)境中應(yīng)有良好的通風(fēng)。在每日8h 工作中，環(huán)氧乙烷濃度應(yīng)不超過1.82mg/m3 （1ppm），15min工作中暴露濃度不超過9.1mg/m3（5.0ppm）。如出現(xiàn)中毒癥狀，需迅速離開現(xiàn)場。輕者呼吸新鮮空氣，直到癥狀消除；重者應(yīng)及時(shí)送醫(yī)院**。
2.1.5.7 臭氧**柜
2.1.5.7.1 目 的
測定臭氧**柜(下簡稱**柜)對物體表面上微生物的殺滅效果，以驗(yàn)證其**性能是否符合原設(shè)計(jì)規(guī)定。
2.1.5.7.2 試驗(yàn)器材
(1) 金黃色葡萄球菌( ATCC 6538 )、大腸桿菌( 8099)、銅綠假單胞菌（ ATCC 15442 ）、白色***( ATCC 10231 )懸液和脊髓灰質(zhì)炎病毒懸液。
(2) 染菌載體(10mm ×10mm，以布片或玻璃片為代表，必要時(shí)可隨**對象，增用或改用其他載體)。
(3) 臭氧采樣裝置和濃度分析儀。
(4) **定量殺滅試驗(yàn)用器材( 見 2.1.1.7，2.1.1.9)。
(5) 脊髓灰質(zhì)炎病毒滅活試驗(yàn)用試液、培養(yǎng)基和器材(見2.1.1.10 )。
(6) 溫度與濕度計(jì)。
2.1.5.7.3 臭氧濃度測定
(1)儀器測定:臭氧濃度可用臭氧分析儀測定。操作按儀器使用說明書規(guī)定進(jìn)行。
(2) 化學(xué)滴定法測定:參考本規(guī)范理化鑒定實(shí)驗(yàn)技術(shù)。
2.1.5.7.4 殺滅微生物試驗(yàn)操作程序
臭氧**柜的臭氧發(fā)生器臭氧發(fā)生量一般不可調(diào)，故試驗(yàn)時(shí)設(shè) 3 個(gè)作用時(shí)間組［時(shí)間分組見2.1.1.7.3（1）］。
（1）**和**殺滅試驗(yàn)
①按 2.1.1.2所示相關(guān)方法制備金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌、白色***、黑曲霉孢子的菌片。必要時(shí)，可增設(shè)其他試驗(yàn)微生物。
②因臭氧在柜內(nèi)擴(kuò)散慢，分布不易均勻，故物品在柜內(nèi)應(yīng)擺放至使用說明書中規(guī)定的*高裝載量(滿載)，以盡量接近實(shí)際應(yīng)用時(shí)的情況。
③以 2 片菌片一組，置一無菌平皿中，勿重疊。試驗(yàn)時(shí)，將放有菌片的平皿蓋打開，分層布放，每層內(nèi)、中、外各點(diǎn)分別放一組樣本。
④按照使用說明書要求，調(diào)節(jié)柜內(nèi)溫度與相對濕度，并記錄備查，然后開啟臭氧發(fā)生器進(jìn)行**。
⑤**至規(guī)定時(shí)間，取出菌片，按 2.1.1.3所示方法進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。對白色***的殺滅試驗(yàn)，用沙堡瓊脂培養(yǎng)基，對黑曲霉菌的殺滅試驗(yàn)，用麥芽浸膏瓊脂培養(yǎng)基，其他方法和步驟均與**殺滅試驗(yàn)相同。因臭氧氣體熏蒸，載體吸收的量少、分解快，可不必進(jìn)行去除殘留臭氧的處理。每組試驗(yàn)重復(fù)3 次。
⑥將未**的菌片2片，放置于**碗柜外室溫下。待試驗(yàn)組**完畢后，同時(shí)進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)檢測。取本次試驗(yàn)同批的 PBS接種培養(yǎng)基培養(yǎng)，作為陰性對照。
[對未固定裝于**箱內(nèi)的臭氧發(fā)生器(如冰箱臭氧**器)，其**效果鑒定，可按其用途，在相應(yīng)的密閉柜內(nèi)進(jìn)行。柜的大小應(yīng)與所設(shè)計(jì)的**有效范圍相近]。
（2）脊髓灰質(zhì)炎病毒滅活試驗(yàn)
①按 2.1.1.10.3所示方法制備脊髓灰質(zhì)炎病毒懸液。若無特殊要求，用玻片為載體。
②在**碗柜滿載的情況下，將干燥的染有脊髓灰質(zhì)炎病毒的載體置**平皿內(nèi)，每平皿放 2片，勿重疊。在**碗柜每層的內(nèi)、外兩個(gè)點(diǎn)各放一含染有脊髓灰質(zhì)炎病毒載體的平皿(大型碗柜可在內(nèi)、中、外各放一平皿)，平皿蓋打開。
③關(guān)閉柜門，開啟電源，按原規(guī)定程序進(jìn)行**。**完畢，按說明書規(guī)定的時(shí)間，打開柜門，取出平皿。將載體移入含 1ml細(xì)胞維持液的試管中。振打后，取樣按 2.1.1.10.4 所示方法檢測殘留脊髓灰質(zhì)炎病毒滴度。
④將未**的染有脊髓灰質(zhì)炎病毒的載體 2 片，放置于**碗柜外室溫下。待試驗(yàn)組**完畢后，立即將載體移入含 1ml細(xì)胞維持液的試管中。振打后，取樣按 2.1.1.10.4 所示方法檢測殘留脊髓灰質(zhì)炎病毒滴度，作為陽性對照。
⑤陰性對照，用不含脊髓灰質(zhì)炎病毒的完全培養(yǎng)基作為陰性對照，以觀察培養(yǎng)基有無污染，細(xì)胞是否生長良好。
⑥試驗(yàn)重復(fù) 3 次。
⑦根據(jù)各組的平均病毒感染滴度（TCID50），分別計(jì)算其對病毒的滅活對數(shù)值。
2.1.5.7.5 評價(jià)規(guī)定
對**及其芽孢和**，在3次試驗(yàn)中，所設(shè)陽性對照組回收菌量在5×105cfu/片～5×106cfu/片，陰性對照無菌生長，試驗(yàn)組中每次試驗(yàn)**及其芽孢和**的殺滅對數(shù)值均≥3；對脊髓灰質(zhì)炎病毒，在 3 次試驗(yàn)中，所設(shè)陽性對照組，脊髓灰質(zhì)炎病毒滴度達(dá) 105 (TCID50)，陰性對照細(xì)胞無污染，試驗(yàn)組中每次試驗(yàn)病毒滴度下降 4 個(gè)對數(shù)值者，該組作用時(shí)間可作為實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)**合格的*短作用時(shí)間。
若陽性或陰性對照組的結(jié)果與上述要求不符，試驗(yàn)作廢，重新進(jìn)行。
2.1.5.7.6 注意事項(xiàng)
(1)對試驗(yàn)結(jié)果有懷疑時(shí)，可在試驗(yàn)時(shí)同步進(jìn)行臭氧濃度測定，以便作進(jìn)一步的分析。
(2)每次試驗(yàn)完畢，應(yīng)充分排除**柜內(nèi)的臭氧氣體，勿使有臭氧殘留，以免影響隨后的試驗(yàn)。
(3) 空氣中 臭氧濃度不得超過0.3mg/m3，臭氧吸入過多，可使人中毒，試驗(yàn)場所應(yīng)保持通風(fēng)良好。
(4)溫度和相對濕度均可影響臭氧氣體對**的殺滅效果，試驗(yàn)時(shí)必須控制好這些條件，使其前后一致。
2.1.5.8臭氧水**器
2.1.5.8.1目的
檢測臭氧水**器發(fā)生的臭氧水**劑對物品表面的**效果，以驗(yàn)證臭氧水**劑對物品表面**的實(shí)用劑量。
臭氧水**劑指應(yīng)用臭氧**設(shè)備制備的含臭氧的水溶液，并以其作為**劑，用于對物品表面等的**。
2.1.5.8.2 試驗(yàn)器材
(1) 金黃色葡萄球菌( ATCC 6538 )、大腸桿菌( 8099)、銅綠假單胞菌（ ATCC 15442 ）、白色***( ATCC 10231 )懸液和脊髓灰質(zhì)炎病毒懸液。
(2)染菌載體(10mm×10mm，以布片為代表，必要時(shí)可隨**對象，增用或改用其他載體)。
(3) 臭氧采樣裝置。
(4) **定量殺滅試驗(yàn)用器材與培養(yǎng)基(見2.1.1.7，2.1.1.9 )。
(5) 脊髓灰質(zhì)炎病毒滅活試驗(yàn)用試液、培養(yǎng)基和器材(見2.1.1.10 )。
(6) 溫度與濕度計(jì)。
(7)500 ml塑料杯。
(8)水流量計(jì)（1L/min～10L/min）。
(9)不銹鋼網(wǎng)。
(10) 臭氧濃度測定用臭氧分析儀和化學(xué)滴定法用試劑、器材等。
2.1.5.8.3臭氧濃度測定
臭氧濃度的測定方法分為化學(xué)滴定法和儀器測定法。
儀器測定法按儀器使用說明書要求進(jìn)行。
（1）通過式臭氧**設(shè)備
測定水樣流出**設(shè)備后臭氧濃度由高到低的衰變曲線。測定時(shí)，若出水流量可調(diào)，設(shè) 3個(gè)流量其中應(yīng)包括該設(shè)備的*大流量和*小流量，若出水流量不可調(diào)，則按說明書要求設(shè) 1個(gè)流量，各流量水樣流出**設(shè)備后，即刻測定水樣中臭氧含量，然后再將水樣放 20℃ 水浴中，設(shè)5個(gè)～6個(gè)時(shí)間段，分別測定水樣中臭氧含量，并繪制臭氧濃度衰變曲線。
（2）暴氣式臭氧**設(shè)備
測定一定容量的水體中臭氧濃度由低到高，直到臭氧濃度達(dá)飽和時(shí)的濃度變化曲線。按說明書要求，加入規(guī)定容量的水樣，通入臭氧氣體，設(shè)5個(gè)～6個(gè)時(shí)間段（應(yīng)測出臭氧濃度達(dá)飽和時(shí)的*短時(shí)間），分別測定水樣中臭氧含量，并繪制臭氧濃度變化曲線。
2.1.5.8.4殺滅微生物試驗(yàn)操作程序
按臭氧設(shè)備制備臭氧水**劑的方式分為暴氣式與通過式兩類。
（1）暴氣方式臭氧**設(shè)備制備臭氧水**劑的殺滅微生物試驗(yàn)
①按 2.1.1.2所示相關(guān)方法制備金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌、枯草桿菌黑色變種芽孢、白色***、黑曲霉孢子的菌片。必要時(shí)，可增設(shè)其他試驗(yàn)微生物。
②有專用容器者，按說明書要求向?qū)Ｓ萌萜鲀?nèi)加入規(guī)定容量的無菌蒸餾水無專用容器者，用容量≥3000ml的燒杯，盛裝3000ml無菌蒸餾水樣，調(diào)水溫至20℃±2℃
若無專用容器但需在更大容量的水樣中進(jìn)行試驗(yàn)者，示**設(shè)備狀況，按使用說明書要求調(diào)整水樣用量，并調(diào)水溫至20℃±2℃。
③將不銹鋼網(wǎng)放盛水容器底部中央，染菌布片放不銹鋼網(wǎng)表面，染菌布片上再蓋一不銹鋼網(wǎng)片。
④連接微孔擴(kuò)散裝置與臭氧氣源出口，開啟臭氧**設(shè)備，開始**處理。
⑤待臭氧暴氣浸泡**至規(guī)定作用時(shí)間（**個(gè)作用時(shí)間應(yīng)不少于水中臭氧達(dá)飽和濃度所需時(shí)間），取出樣片，移入含5ml中和劑溶液的試管中，中和10 min，進(jìn)行活菌計(jì)菌。
⑥試驗(yàn)同時(shí)設(shè)陽性對照和陰性對照組，陽性對照用無臭氧氣體代替臭氧氣體，在水樣體積和暴氣量等相同條件下，將染菌樣片暴氣浸泡至*長作用時(shí)間，取出樣片，進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)。
⑦試驗(yàn)重復(fù)3次。
⑧根據(jù)各組殺滅對數(shù)值計(jì)算結(jié)果，確定殺滅**繁殖體，**或**芽孢的殺滅對數(shù)值為3所需*低有效濃度和相應(yīng)的作用時(shí)間。
（2）通過式臭氧**設(shè)備制備的臭氧水**劑流動載體浸泡殺滅微生物試驗(yàn)
①按 2.1.1.2所示相關(guān)方法制備金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌、枯草桿菌黑色變種芽孢、白色***、黑曲霉孢子的菌片。必要時(shí)，可增設(shè)其他試驗(yàn)微生物。
②將臭氧水**設(shè)備開機(jī)5min，使臭氧水中臭氧含量穩(wěn)定。
③取不銹鋼網(wǎng)放盛水容器底部中央，染菌布片放不銹鋼網(wǎng)表面，染菌布片上再蓋一不銹鋼網(wǎng)片。用臭氧水**劑沿容器壁流下，流動浸泡**至說明書規(guī)定作用時(shí)間，取樣檢驗(yàn)。
④試驗(yàn)同時(shí)設(shè)陽性和陰性對照。陽性對照組用自來水代替臭氧水**劑，在相同流量下流動浸泡至*長作用時(shí)間。取出樣片，進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)。
⑤取本次試驗(yàn)同批的 PBS 和培養(yǎng)基接種培養(yǎng)基培養(yǎng)，作為陰性對照。
⑥試驗(yàn)重復(fù)3次。
⑦根據(jù)各組殺滅率計(jì)算結(jié)果，確定殺滅**繁殖體、**或**芽孢的殺滅對數(shù)值為3所需*低有效濃度和相應(yīng)的作用時(shí)間。
2.1.5.8.5 脊髓灰質(zhì)炎病毒滅活試驗(yàn)
(1) 按 2.1.1.10.3 所示方法制備脊髓灰質(zhì)炎病毒懸液。若無特殊要求，用玻片為載體。
(2)將制備的脊髓灰質(zhì)炎病毒玻片加到無菌試管中，使帶有病毒的一面向上。
(3)將臭氧水**設(shè)備開機(jī)5min，使臭氧水中臭氧含量穩(wěn)定。
(4) 向含有脊髓灰質(zhì)炎病毒玻片的試管中加入1.0ml的臭氧水**劑，浸泡**至規(guī)定作用時(shí)間，取出玻片載體，移入含 1ml細(xì)胞維持液的試管中。振打后，取樣按 2.1.1.10.4 所示方法檢測殘留脊髓灰質(zhì)炎病毒滴度。
(5)將未**的染有脊髓灰質(zhì)炎病毒的玻片，加到1.0ml的無菌蒸餾水中，浸泡至規(guī)定**作用的*長時(shí)間。取出玻片載體，移入含 1ml細(xì)胞維持液的試管中。振打后，取樣按 2.1.1.10.4 所示方法檢測殘留脊髓灰質(zhì)炎病毒滴度，作為陽性對照。
（6）陰性對照，用不含脊髓灰質(zhì)炎病毒的完全培養(yǎng)基作為陰性對照，以觀察培養(yǎng)基有無污染，細(xì)胞是否生長良好。
(7) 試驗(yàn)重復(fù) 3 次。
(8) 根據(jù)各組的平均病毒感染滴度（TCID50），分別計(jì)算其對病毒的滅活對數(shù)值。
2.1.5.8.6 評價(jià)規(guī)定
對**及其芽孢和**，在3次試驗(yàn)中，所設(shè)陽性對照組的回收菌量在5 × 105cfu/片～5 ×106cfu/片，陰性對照無菌生長，試驗(yàn)組中每次試驗(yàn)**及其芽孢和**的殺滅對數(shù)值均≥3.00；對脊髓灰質(zhì)炎病毒，在3次試驗(yàn)中，所設(shè)陽性對照組，脊髓灰質(zhì)炎病毒滴度達(dá)105(TCID50)，陰性對照細(xì)胞無污染，試驗(yàn)組中每次試驗(yàn)病毒滴度下降4個(gè)對數(shù)值者，該組作用時(shí)間可作為實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)**合格的*短作用時(shí)間。
若陽性或陰性對照組的結(jié)果與上述要求不符，試驗(yàn)作廢，重新進(jìn)行。
2.1.5.8.7 注意事項(xiàng)
對試驗(yàn)結(jié)果有懷疑時(shí)，可在試驗(yàn)時(shí)同步進(jìn)行臭氧濃度測定，以便作進(jìn)一步的分析。
2.1.6**與**指示器材鑒定試驗(yàn)
2.1.6.1 壓力蒸汽**生物指示物鑒定試驗(yàn)
2.1.6.1.1 目 的
測定壓力蒸汽**生物指示物所含菌量，以及在121℃±0.5℃飽和蒸汽作用下的存活時(shí)間、殺滅時(shí)間與 D 值是否達(dá)到要求指標(biāo)。
2.1.6.1.2 實(shí)驗(yàn)器材
(1) 壓力蒸汽**生物指示器材抗力檢測器 (biological indicator evaluator resistometer，pressured steam sterilization，BIER，下簡稱抗力檢測器)。對抗力檢測器要求的技術(shù)指標(biāo)：時(shí)間控制以秒為單位；溫度控制以0.1℃為單位；加熱至預(yù)定溫度的時(shí)間應(yīng)≤10s；排氣時(shí)間≤5s；試驗(yàn)期間柜室內(nèi)溫度誤差≤±0.5℃。
(2) 56℃～60℃溫箱。
(3) 溴甲酚紫蛋白胨培養(yǎng)液 (嗜熱脂肪桿菌芽胞恢復(fù)培養(yǎng)基，見附錄A)。
(4) 嗜熱脂肪桿菌芽胞恢復(fù)瓊脂培養(yǎng)基 (見附錄A)。
(5) 眼科鑷子 (夾取菌片用)。
(6) 磷酸鹽緩沖液 (PBS，0.03 mol/L，pH 7.2)。
(7) 回收液 (含 0.1% 吐溫 80 的 PBS 液)。
2.1.6.1.3 生物指示物微生物含量與抗力標(biāo)準(zhǔn)
(1) 嗜熱脂肪桿菌(Bacillus stearothermophilus ATCC 7953或SSI K31) 芽孢。回收菌量為5×105cfu/片～5×106cfu/片，或5×105cfu/ml～5×106cfu/ml。
(2) 在121℃±0.5℃飽和蒸汽條件下，存活時(shí)間≥3.9min，殺滅時(shí)間≤19min。
(3) 在121℃±0.5℃飽和蒸汽條件下，D值為1.3min～1.9min。
2.1.6.1.4 生物指示物含菌量的測定
隨機(jī)抽取3個(gè)生物指示物樣本。樣本如為菌懸液式指示物，直接用 PBS 作適當(dāng)稀釋后，按2.1.1.3 規(guī)定進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)即可；樣本如為含菌載體式指示物 (如菌片)，應(yīng)先置回收液中洗下芽孢，并以PBS稀釋至適當(dāng)濃度，再進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)培養(yǎng)。培養(yǎng)溫度為56℃～60℃，24h觀察結(jié)果。培養(yǎng)基仍用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。檢測菌量符合2.1.6.1.3者為合格。
2.1.6.1.5 存活時(shí)間和殺滅時(shí)間的測定
下以生物指示管的測定為例：
(1) 試驗(yàn)按作用時(shí)間分為 3.9min 和 19min 兩組，各組測定20個(gè)樣本。
(2) 先將抗力檢測器的電熱蒸汽發(fā)生器加滿蒸餾水，以不超過*高水位為度。
(3) 接通檢測器電源，預(yù)熱，使達(dá)到預(yù)定蒸汽壓。
(4) 設(shè)定**溫度(121℃±0.5℃)和作用時(shí)間。
(5) 啟動抗力檢測器工作程序，使自動運(yùn)行兩個(gè)循環(huán)，以保證柜室等得到充分的預(yù)熱。
(6) 將生物指示管 (每批放 20個(gè)樣本) 放專用載物架上并置抗力檢測器柜室中，保證每個(gè)樣本都可充分暴露于蒸汽中。
(7) 關(guān)閉柜門，先設(shè)定一組所規(guī)定的**時(shí)間。
(8) 啟動抗力檢測器工作程序，使自動進(jìn)行抽真空→柜室加熱→**處理→排氣。
(9) 打開柜門，取出生物指示管。
(10) 緊接著重復(fù) (5)～(9) 的程序進(jìn)行另一組的測定。
(11) 取出的生物指示管應(yīng)盡快 (勿超過 2h) 放入 56℃～60℃溫箱，培養(yǎng) 7d，觀察*終結(jié)果。
(12) 測定結(jié)果，3.9min 組(存活時(shí)間組)20個(gè)生物指示管均有菌生長；19min 組(殺滅時(shí)間組)20個(gè)生物指示管均無菌生長時(shí)，可判為合格。其中一個(gè)組或兩組各有一個(gè)樣本未達(dá)規(guī)定要求，可再用4組樣本重復(fù)試驗(yàn)(3.9min和19min組各測試2次)。重復(fù)試驗(yàn)中，如各樣本均達(dá)規(guī)定要求，仍可認(rèn)為合格。
[ 對生物指示菌片測定時(shí)，操作程序與判斷標(biāo)準(zhǔn)與上述生物指示管基本相同，只是將單片菌片裝于牛皮紙袋中，以防**時(shí)被冷凝水浸濕。此外**完畢，需將樣本分別接種于溴甲酚紫蛋白胨培養(yǎng)液中培養(yǎng)，7d 觀察*終結(jié)果]。
2.1.6.1.6 D 值的測定
(1) 隨機(jī)抽取 50個(gè)樣本，在 0min～20min 范圍內(nèi)分成 10個(gè)作用時(shí)間組進(jìn)行試驗(yàn)。每組 5個(gè)樣本。作用時(shí)間遞增幅度，可根據(jù)預(yù)備試驗(yàn)結(jié)果適當(dāng)變動(*長時(shí)間必須達(dá)到使菌全部死亡的作用時(shí)間)。
(2) 將各組樣本按 2.1.6.1.5 (2)～(10) 所示程序，分次進(jìn)行**處理。
(3) **完畢，按 2.1.6.1.4 所示對各組樣本隨機(jī)抽取3個(gè)進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。
(4) 計(jì)算每個(gè)作用時(shí)間樣本上平均存活芽孢數(shù)的對數(shù)值。以作用時(shí)間為橫坐標(biāo)(X)，存活芽孢數(shù)的對數(shù)值為縱坐標(biāo)(Y)，算出芽孢存活與作用時(shí)間的回歸方程(Y = a + bX)。
(5) 計(jì)算各實(shí)際測定值與直線回歸方程的相關(guān)程度(相關(guān)系數(shù))。
(6) 根據(jù)所得直線回歸方程式，計(jì)算出減少90%芽孢數(shù)所需的作用時(shí)間(D 值)。D值符合2.1.6.1.3 者為合格。
2.1.6.1.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)
(1) 在規(guī)定的貯存條件下，存放足量產(chǎn)品。
(2) 按使用說明書規(guī)定的有效期限抽樣檢測，先觀察外觀，特別注意指示劑中的培養(yǎng)液顏色有無變化。
(3) 在外觀正常情況下，進(jìn)一步按 2.1.6.1.4、2.1.6.1.5 所示方法測定活菌數(shù)量、存活時(shí)間、殺滅時(shí)間。菌量數(shù)下降＜50%，存活時(shí)間和殺滅時(shí)間又在規(guī)定合格范圍內(nèi)(見 2.1.6.1.3)者，該貯存期可視為產(chǎn)品的有效保存期。
2.1.6.1.8 注意事項(xiàng)
(1) 測定生物指示劑的抗力時(shí)，必須用壓力蒸汽**生物指示劑檢測器進(jìn)行，不能用普通壓力蒸汽**器代替。
(2) 使用抗力檢測器進(jìn)行測定時(shí)，為確保每次加熱時(shí)間的一致，每次間隔時(shí)間不宜超過100s。如時(shí)間過長，柜室必須重新預(yù)熱。
(3) 培養(yǎng)基性能對熱損傷后的芽孢恢復(fù)有一定影響，試驗(yàn)時(shí)不能用普通培養(yǎng)基代替恢復(fù)培養(yǎng)基。
(4) 嚴(yán)格無菌操作，尤其是對生物指示菌片進(jìn)行存活和殺滅時(shí)間測定時(shí)。
2.1.6.2 壓力蒸汽**化學(xué)指示卡鑒定試驗(yàn)
2.1.6.2.1 目 的
測定下排氣式、預(yù)真空式和脈動真空式壓力蒸汽**化學(xué)指示卡(下簡稱化學(xué)指示卡)產(chǎn)品在飽和蒸汽作用下所產(chǎn)生的顏色變化，與擬代表的溫度、**作用時(shí)間的吻合情況，以作為判斷該指示卡是否合格的依據(jù)。對其他相似類型化學(xué)指示物的鑒定，可參照本試驗(yàn)的有關(guān)原則進(jìn)行。
2.1.6.2.2 實(shí)驗(yàn)器材
(1) 壓力蒸汽**生物指示物抗力檢測器 [見 2.1.6.1.2 (1)，下簡稱抗力檢測器]。
(2) 生物指示物 (經(jīng)鑒定合格者，見 2.1.6.1)。
(3) 留點(diǎn)溫度計(jì) (60℃～140℃，應(yīng)經(jīng)檢定合格)。
2.1.6.2.3 試驗(yàn)分組
試驗(yàn)根據(jù)作用溫度和時(shí)間分組，一般情況下，以使用說明書表明的變色溫度和作用時(shí)間為第1組，而后溫度不變，作用時(shí)間縮短10min為第2組；另外，作用時(shí)間不變，仍為20min，溫度下降4℃為第3組。預(yù)真空和脈動真空式壓力蒸汽**，因所需作用時(shí)間很短，故第2組只降低2min即可。
例如，某一下排氣式壓力蒸汽**化學(xué)指示卡使用說明書寫明，在溫度為 121℃，作用 20 min 可全部達(dá)到變色完全 (與標(biāo)準(zhǔn)合格色塊相同)。對該指示卡鑒定試驗(yàn)時(shí)，可分組如下:
第 1 組 121℃，20min；
第 2 組 121℃，10min；
第 3 組 117℃，20min。
又如，某一預(yù)真空式壓力蒸汽**化學(xué)指示卡使用說明書寫明，在溫度為 132℃，作用 3min 可全部達(dá)到變色完全。對該指示卡鑒定試驗(yàn)時(shí)，可分組如下:
第 1 組 132℃，3min；
第 2 組 132℃，1min；
第 3 組 128℃，3min。
[分組測試的目的是：①驗(yàn)證使用說明書所表明的溫度和作用時(shí)間，能否使指示卡變色完全；②測試**不完全的溫度或時(shí)間條件下，化學(xué)指示變色不完全 (未達(dá)到與標(biāo)準(zhǔn)合格色塊深度相同) 的比例]。
2.1.6.2.4 實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)操作程序
(1) 每組試驗(yàn)，取 10 片化學(xué)指示卡、1 件生物指示器材和 1 支留點(diǎn)溫度計(jì)，同時(shí)放入抗力檢測器中。
(2) 操作抗力檢測器，將各組樣本按 2.1.6.1.5 (2)～(10) 所示程序分次進(jìn)行處理 (各試驗(yàn)組要求的溫度和作用時(shí)間，見 2.1.6.2.3)。
(3) 立即打開柜門，取出上述物品，進(jìn)行檢測。
(4) 檢測時(shí)，觀察留點(diǎn)溫度計(jì)所示溫度；對比化學(xué)指示卡上變**塊與標(biāo)準(zhǔn)合格色塊的顏色，確認(rèn)是否達(dá)到合格要求；將生物指示物放入 56℃溫箱中培養(yǎng) 7d，并觀察是否有菌生長。
(5) 系統(tǒng)記錄各組留點(diǎn)溫度計(jì)、化學(xué)指示卡和生物指示物的結(jié)果。
(6) 各組試驗(yàn)均重復(fù) 3 次。
(7) 3 次測定結(jié)果均符合以下全部情況者可判為合格：①第 1 組指示卡 100% 變色完全，第 2 組與第 3 組指示卡 ≤20% 變色完全；②各組生物指示物結(jié)果與指示卡基本同步；③留點(diǎn)溫度計(jì)讀數(shù)與試驗(yàn)規(guī)定的溫度，相差不超過 ±0.5℃。
2.1.6.2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)
取包裝完好并在室溫、避光、干燥條件下，保存至一定時(shí)間 (至少半年) 的化學(xué)指示卡，用實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)(2.1.6.2.4) 方法進(jìn)行檢測。若結(jié)果符合上述要求，可視為指示卡在該保存期內(nèi)性能穩(wěn)定。
2.1.6.2.6 注意事項(xiàng)
(1) 化學(xué)指示卡的鑒定，除注意其在到達(dá)**要求溫度和時(shí)間時(shí)可變?yōu)楹细耦伾?，還必須觀察其在未達(dá)到**要求溫度和時(shí)間時(shí)是否不會變成合格顏色。從防止**不合格角度看，后者更為重要。因此，在試驗(yàn)中低于**要求溫度和時(shí)間組絕不可省略。
(2) 測定時(shí)應(yīng)使用飽和蒸汽，否則可影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。
(3) 留點(diǎn)溫度計(jì)檢定時(shí)所觀測到的誤差，在記錄試驗(yàn)溫度時(shí)，應(yīng)將讀數(shù)校正。
(4) 壓力蒸汽**生物指示物抗力檢測器為一專用設(shè)備，國外和我國均有生產(chǎn)。由于試驗(yàn)要求的精密度較高，不宜用一般壓力蒸汽**器代替。
(5) 試驗(yàn)中所用化學(xué)指示卡和生物指示物必須為同批產(chǎn)品。
(6) 下排氣式和預(yù)真空 (包括脈動真空) 式壓力蒸汽**對溫度和作用時(shí)間的**度要求不同，故在兩類化學(xué)指示卡試驗(yàn)分組中溫度和作用時(shí)間的組距亦不同，兩者不宜混用。
(7) 對所要求的重復(fù)性試驗(yàn)，不可只在同次試驗(yàn)中增加一些化學(xué)指示卡，而應(yīng)每重復(fù)一次試驗(yàn)即應(yīng)進(jìn)行一次壓力蒸汽**處理，以防產(chǎn)生系統(tǒng)性誤差。
2.1.6.3 壓力蒸汽**化學(xué)指示膠帶與化學(xué)指示標(biāo)簽的鑒定試驗(yàn)
2.1.6.3.1 目 的
測定壓力蒸汽**用化學(xué)指示膠帶與化學(xué)指示標(biāo)簽在規(guī)定溫度的飽和蒸汽和作用時(shí)間下的變**況，以作為判斷該指示膠帶和標(biāo)簽是否適用于作為經(jīng)壓力蒸汽**處理標(biāo)志的依據(jù)。
2.1.6.3.2 實(shí)驗(yàn)器材
(1) 下排氣式壓力蒸汽**器與預(yù)真空或脈動真空壓力蒸汽**器。
(2) 留點(diǎn)溫度計(jì) (60℃～140℃，經(jīng)鑒定合格)。
2.1.6.3.3 試驗(yàn)分組
試驗(yàn)根據(jù)作用溫度和時(shí)間分組，一般情況下化學(xué)指示膠帶和標(biāo)簽所要求的準(zhǔn)確度較化學(xué)指示卡類產(chǎn)品為寬松。分組時(shí)，以使用說明書表明的變色溫度和作用時(shí)間為第 1 組；而后，溫度不變，作用時(shí)間縮短10min 為第 2 組；另外，時(shí)間不變，溫度下降 10℃為第 3 組。
預(yù)真空和脈動真空壓力蒸汽**，因所需時(shí)間很短，故第 2 組縮短至 1min 即可。
例如，使用說明書表明，某種用于下排氣式壓力蒸汽**的化學(xué)指示膠帶，在溫度為121℃，作用 20 min可全部達(dá)到變色完全 (與標(biāo)準(zhǔn)合格色塊相同)。試驗(yàn)時(shí)，可分組如下：
第 1 組 121℃，20min；
第 2 組 121℃，10min；
第 3 組 111℃，20min。
又如，某一用于預(yù)真空與脈動真空式壓力蒸汽**的的化學(xué)指示膠帶，說明書寫明，在溫度為 132℃，作用 3min 可全部達(dá)到變色完全。試驗(yàn)時(shí)，可分組如下：
第 1 組 132℃，3min；
第 2 組 132℃，1min；
第 3 組 122℃，3min。
[分組測試的目的是：①驗(yàn)證使用說明書所表明的溫度和作用時(shí)間，能否使樣本變色完全；②測試**不完全溫度或時(shí)間條件下，化學(xué)指示膠帶與化學(xué)指示標(biāo)簽變色不完全(未達(dá)到與標(biāo)準(zhǔn)合格色塊深度相同) 的比例]。
2.1.6.3.4 試驗(yàn)操作程序
(1) 每組試驗(yàn)取 5 個(gè)標(biāo)簽或來自不同卷的 5 段膠帶，粘貼于厚紙片上，隨同一留點(diǎn)溫度計(jì)放入相應(yīng)的壓力蒸汽**器中。
(2) 按常規(guī)**方法處理，待達(dá)到要求的溫度及其相應(yīng)的壓力，持續(xù)至規(guī)定的時(shí)間，排空柜室內(nèi)蒸汽使成常壓。
(3) 打開柜門，取出樣本。
(4) 觀察、記錄化學(xué)指示膠帶、標(biāo)簽，是否變色和留點(diǎn)溫度計(jì)顯示的溫度。
(5) 各組試驗(yàn)重復(fù) 3 次。
(6) 3 次試驗(yàn)均符合以下條件者為合格：①第 1 組全部樣本變色完全，②第 2 和第 3 組變色完全的樣本比例不超過 20%。③留點(diǎn)溫度計(jì)所示溫度與設(shè)定的溫度相差不超過±0.5℃。
[對未印有變色完全的標(biāo)準(zhǔn)色塊的指示膠帶和標(biāo)簽，可依據(jù)生產(chǎn)者另外提供的完全變色樣本，對變色完全與否進(jìn)行判斷]。
2.1.6.3.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)
取包裝完好的樣本，在室溫、避光、干燥條件下保存至使用說明書規(guī)定的有效期限，用2.1.6.3.4 規(guī)定的方法進(jìn)行檢測，若結(jié)果符合要求，所測指示膠帶與標(biāo)簽可視為在該保存期內(nèi)性能穩(wěn)定。
2.1.6.3.6 注意事項(xiàng)
(1) 于 121℃條件下檢測合格者，只能于121℃**時(shí)使用，于132℃條件下檢測合格者，只能于132℃**時(shí)使用。只有兩組檢測均合格者，才能兼用于上述兩種溫度**的監(jiān)測。
(2) 其他注意事項(xiàng)見 2.1.6.2.6 中的有關(guān)內(nèi)容。
2.1.6.4 紫外線燈管照射強(qiáng)度化學(xué)指示卡鑒定試驗(yàn)
2.1.6.4.1 目 的
測定紫外線燈管照射強(qiáng)度化學(xué)指示卡 (下簡稱指示卡) 在照射后顏色的變化與所受照射劑量的相關(guān)情況，從而確定是否可用于使用單位對紫外線燈管照射強(qiáng)度的自檢。
2.1.6.4.2 試驗(yàn)器材
(1) 紫外線照度計(jì) (在計(jì)量標(biāo)定有效期內(nèi)，下簡稱照度計(jì))。
(2) 低臭氧直管紫外線燈 [30 W，紫外線強(qiáng)度 (輻照度值) ≥90μW/cm2]。
(3) 紫外線燈測定架（附220V穩(wěn)壓器。下簡稱測定架）。
2.1.6.4.3 試驗(yàn)操作程序
(1) 將紫外線燈裝于測定架上，指示卡置燈管下方垂直中心位置的照射臺上 (燈管與照射臺距離可上下調(diào)整，以使達(dá)檢測時(shí)規(guī)定的照射強(qiáng)度)。
(2) 開啟紫外線燈，待 5 min 后燈管工作穩(wěn)定，按指示卡上各標(biāo)準(zhǔn)色塊注明的強(qiáng)度，分別調(diào)整好燈管下照射臺中心測試點(diǎn)處的紫外線照射強(qiáng)度 (用照度計(jì)測定)，以進(jìn)行隨后的照射試驗(yàn)。
(3) 照射時(shí)，在測定架上對指示卡變**進(jìn)行照射。每 10 張指示卡為一組，每組照射1min，每個(gè)強(qiáng)度照射3組（共 30 張指示卡）。
(4) 照射后，即刻用肉眼觀察照射過的指示卡，比較其變**色塊與相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)色塊的顏色。
(5) 同時(shí)用照度計(jì)測定紫外線照射強(qiáng)度，以與指示卡結(jié)果核對。
(6) 變**色塊與標(biāo)準(zhǔn)色塊，以及指示卡檢測結(jié)果與照度計(jì)測定結(jié)果的符合率均≥90% 者，可判定為合格。
2.1.6.4.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)
(1) 在室溫避光條件下，存放足量指示卡。
(2) 按使用說明書規(guī)定的期限抽樣，每次抽取20 份樣本按 2.1.6.4.3 方法進(jìn)行檢測。
(3) 試驗(yàn)結(jié)果符合合格要求 [2.1.6.4.3 (6)]，可認(rèn)為該存放時(shí)間即為其貯存有效期。
2.1.6.4.5 注意事項(xiàng)
(1) 為防失準(zhǔn)，所用照度計(jì)必須定期檢測校正，并在計(jì)量標(biāo)定有效期內(nèi)。
(2) 試驗(yàn)中所用指示卡必須為同一批產(chǎn)品。
(3) 測試時(shí)，對指示卡照射1min，時(shí)間應(yīng)準(zhǔn)確，過長或過短均可影響結(jié)果。
(4) 指示卡測定時(shí)，應(yīng)防紫外線燈光直射。
(5) 光敏指示卡反應(yīng)變色后，久存可能顏色有所改變，為此檢測結(jié)果應(yīng)即時(shí)觀察并用文字記錄。
(6) 測試應(yīng)分多次進(jìn)行，否則易發(fā)生系統(tǒng)誤差。
(7) 電壓波動可影響燈管放射的紫外線強(qiáng)度，試驗(yàn)時(shí)應(yīng)予注意。
2.1.6.5 **劑濃度試紙鑒定試驗(yàn)
2.1.6.5.1 目的
通過檢測**劑濃度試紙 (下簡稱試紙) 顏色反應(yīng)情況與溶液中**劑濃度相關(guān)程度，以作為對其應(yīng)用做出評價(jià)。
2.1.6.5.2 實(shí)驗(yàn)器材
**劑有效成分化學(xué)分析器材。
2.1.6.5.3 測定分組
鑒定中，應(yīng)根據(jù)試紙使用說明書所列可測試**劑種類分別進(jìn)行測試。測試中，取比色卡上所示標(biāo)準(zhǔn)色塊中的高、中、低3個(gè)濃度作為3個(gè)組。對每種**劑，每組濃度測試30個(gè)樣本(取自3個(gè)以上*小包裝)。3組的主要有效成分濃度，均應(yīng)分別用化學(xué)滴定法測定。
2.1.6.5.4 試驗(yàn)操作程序
(1) 配制各種**劑的高、中、低 3 組濃度溶液，并按本規(guī)范中有關(guān)方法測定其主要有效成分濃度。
(2) 對各**劑濃度組，分別用試紙浸于溶液中，潤濕即取出。半分鐘后與標(biāo)準(zhǔn)色塊比較，確定所測濃度。每條試紙作為1個(gè)樣本，逐個(gè)樣本分別進(jìn)行測定。
(3) 將試紙測得的濃度與化學(xué)滴定法測得的濃度比較，該組樣本總符合率≥90% 者為合格。
2.1.6.5.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)
(1) 按說明書要求，在室溫存放足量指示卡。
(2) 按使用說明書規(guī)定的期限抽樣，按 2.1.6.5.4 所示方法進(jìn)行檢測。
(3) 試驗(yàn)結(jié)果符合合格要求[2.1.6.5.4 (3)] 者，可認(rèn)為該存放時(shí)間即為其貯存有效期。
2.1.6.5.6 注意事項(xiàng)
(1) 有效成分不穩(wěn)定的**劑，應(yīng)在試紙檢測后盡快用化學(xué)法滴定其濃度。
(1) 對于反應(yīng)后顏色可消退的產(chǎn)品，應(yīng)及時(shí)觀察結(jié)果，并用文字記錄。
2.1.7 **醫(yī)療用品包裝材料鑒定試驗(yàn)
**醫(yī)療用品包裝村翻新是指要求*終**（即包裝后**）的醫(yī)療用品的包裝材料。
2.1.7.1理化性能鑒定
2.1.7.1.1一般檢查
（1）在日光或良好的人工光源下檢查，包裝應(yīng)無削弱其功能的洞孔、裂縫、撕裂、皺痕或會影響其功能的局部加厚或變薄。
（2）包裝內(nèi)醫(yī)療用品應(yīng)無未經(jīng)保護(hù)的，可能會破壞包裝的尖銳邊緣或突出物。
2.1.7.1.2質(zhì)量測定(可參考ISO 536)
（1）器材
1)天平：感量2mg，測量**度0.5%
2) 切割機(jī)：切割面積**度1.0%
（2）操作步驟
1）條件：在溫度23℃±1℃，相對濕度50%±2%條件下進(jìn)行
2）取樣：取5份樣品，按每片面積為500cm2（200mm×250mm）制樣片，每份樣品切4片樣片，共20個(gè)樣片。
3）稱量：稱取每片樣片重量，以g為單位，保留三位有效數(shù)字
4）計(jì)算：計(jì)算平均值與標(biāo)準(zhǔn)差
質(zhì)量（g/m2） = m × 10000 / A
式中：m為樣片平均質(zhì)量（g）
A為樣片平均面積（cm2）
（3）結(jié)果報(bào)告：在一定溫濕度條件下，每平方米樣片的平均重量（g）。
（4）評價(jià)：包裝材料單位面積的平均質(zhì)量，應(yīng)在產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)的±5% 范圍內(nèi)。紙質(zhì)材料的平均質(zhì)量應(yīng)≥56g/m2。
（5）注意事項(xiàng)：在制備樣片時(shí)避免用手直接接觸。
2.1.7.1.3pH值測定(可參考ISO 6588)
（1）器材
1）蒸餾水或去離子水：電導(dǎo)率≤0.1 mS/m
2）標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液：pH值4.0，6.9，9.2
3）pH計(jì)：分辯率0.05
4）回流冷凝器
（2）操作步驟
稱取樣品2 g，**到0.1g。粉碎成約5mm×5mm大小，放入帶塞細(xì)頸玻璃燒瓶內(nèi)。將100ml蒸餾水加入另一同樣帶塞細(xì)頸玻璃燒瓶內(nèi)，連接回流冷凝器，將水加熱到接近沸騰。移去冷凝器，將接近沸騰的水加入含有樣品的燒瓶內(nèi)，連接冷凝器慢煮1h。用冷凝器快速冷卻至20℃～25℃。讓纖維沉淀，并輕輕將抽提液倒入小燒杯內(nèi)，進(jìn)行pH測定。
（3）結(jié)果報(bào)告: 取兩次測定結(jié)果的平均值。
（4）評價(jià)：包裝材料水提取物的pH值應(yīng)在5～8范圍內(nèi)。
2.1.7.1.4氯化物含量測定(可參考ISO 9197-1)
2.1.7.1.5硫酸鹽含量測定(可參考ISO 9198)
2.1.7.1.6熒光測定（可參考EN 868-2）
2.1.7.2**因子穿透性能鑒定
(1) **條件
1) 壓力蒸汽**：121 ℃，20min～30min ；134 ℃，2min～6min。
2) 環(huán)氧乙烷**：溫度54℃，環(huán)氧乙烷濃度600mg/L～1000mg/L，作用至預(yù)定時(shí)間。
3) 輻照**：輻照劑量10 kGy～30 kGy
(2) 操作要求
1) 壓力蒸汽**：按GB 18278-2000進(jìn)行。
2) 環(huán)氧乙烷**： 參照2.1.5.6環(huán)氧乙烷**效果鑒定試驗(yàn)進(jìn)行。
3) 輻照**：按GB 18280-2000進(jìn)行。
(3) 結(jié)果報(bào)告：包裝袋上化學(xué)指示色塊變**況及包裝內(nèi)生物指示劑**情況。
(4) 評價(jià)：在**條件下，所有化學(xué)指示色塊均達(dá)規(guī)定顏色。包裝內(nèi)生物指示劑應(yīng)無菌生長。
2.1.7.3環(huán)氧乙烷殘留水平測定(可參考ISO 10993-7)
2.1.7.4對包裝標(biāo)識的影響
(1) 包裝及其標(biāo)識不因**而變色。
(2) 包裝標(biāo)識不因**而變得難以辨認(rèn)。
2.1.7.5微生物屏障性能鑒定
2.1.7.5.1包裝材料不透氣性試驗(yàn)—染色滲透試驗(yàn)
(1)器材
1)海綿：由醋酸纖維海綿制取，其尺寸為110mm×75mm×32mm，用防水膠粘劑與尺寸為110mm×75mm×12mm的鋼板粘結(jié)，其總重量控制在800g±50g。
2）平滑玻璃
3）吸紙：白色中快吸濾紙或色層分析紙
4）染色液：1%莧菜紅水溶液見附錄A
5)淺盤：深度不小于15mm，*小面積為135 mm×95 mm
6) 樣片：面積250mm×105mm
(2)操作步驟
1)取一塊面積與樣片相同的吸紙，放在玻璃表面，將待測試料的內(nèi)表面與吸紙接觸。
2) 將染色液倒入淺盤中，使海綿在淺盤內(nèi)滯留1min，取出海綿，靠著盤的邊把多余的液體擠除。
3)將海綿放在樣片上，保證海綿的邊緣在樣片邊部之內(nèi)（且距邊部不少于15mm），并靜置2 min。
4) 取走海綿，檢查紙的被污染情況。
(3)結(jié)果報(bào)告: 報(bào)告被沾染的吸收紙的樣片數(shù)量。
(4)評價(jià)：吸收紙上不沾染顏料。
2.1.7.5.2透氣性材料微生物屏障試驗(yàn)
(1)濕性條件下微生物屏障性能
1）器材
①試驗(yàn)微生物:金黃色葡萄球（ATCC 6538）
②培養(yǎng)基: 血瓊脂、營養(yǎng)瓊脂、葡萄糖營養(yǎng)肉湯
③真空干燥箱：100 mbar
④樣片：面積50mm×50mm
2）操作步驟
①將樣片于134℃壓力蒸汽**6min，100mbar真空干燥10min。
②將金黃色葡萄球接種于6ml葡萄糖營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基內(nèi)，取37℃培養(yǎng)16h后的菌懸液作活菌計(jì)數(shù)。
③將預(yù)處理的樣片外表面朝上平鋪于無菌平皿內(nèi)。
④用含107cfu/ml的金黃色葡萄球菌懸液滴到樣片上，互不接觸滴5滴，每滴0.1ml。
⑤將染菌樣片在溫度20℃～25℃，相對濕度40%～50%條件下放置使其干燥，時(shí)間不超過6h。
⑥將染菌樣片平鋪于血瓊脂培養(yǎng)基表面，完全接觸，染菌面朝上，5s～6s后將樣片移開。
⑦將血瓊脂培養(yǎng)基于37℃培養(yǎng)16h～24h進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。
3) 結(jié)果報(bào)告：每個(gè)血瓊脂培養(yǎng)基平板上生長的菌落數(shù)以及5個(gè)平板上生長的菌落總數(shù)。
4) 評價(jià)
①5個(gè)培養(yǎng)基平板上均無菌生長，試驗(yàn)菌不能透過樣片。
②如5個(gè)培養(yǎng)基平板上生長的菌落總數(shù)≤5，則用20個(gè)樣片復(fù)測，在20個(gè)平板上生長的菌落數(shù)≤5為合格。
(2) 干性條件下微生物屏障性能
1) 器材
①試驗(yàn)瓶：250 ml有蓋玻璃瓶，螺旋蓋帶有34 mm的孔：密封墊圈內(nèi)徑34mm，由聚四氟乙烯(PTFE)或帶PTFE覆蓋層材料制成。
②試驗(yàn)微生物：枯草桿菌黑色變種 (ATCC 9372)芽孢
③培養(yǎng)基：營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基
④鋁泊、濾紙
2) 操作步驟
①取100ml含106cfu/ml芽孢的乙醇(96%) 懸液與100g無菌石英粉(0.04mm～0.15mm)混合，50℃干燥16h。
②在試驗(yàn)瓶內(nèi)加入20ml營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基并使凝固。
③將10個(gè)直徑為42mm的圓形樣片分別置于試驗(yàn)瓶兩個(gè)密封墊圈之間，并用螺旋蓋適當(dāng)壓緊，使樣片被密封墊圈緊壓在瓶沿上。
④將試驗(yàn)瓶用鋁泊包裹，于121℃**20min。
⑤**并冷卻后，移去鋁泊包裹，稱取0.25g染菌石英粉均勻撒于樣片上。
⑥將試驗(yàn)瓶放入培養(yǎng)箱加熱到50℃，取出放入冷藏箱降至10℃。如此為1次，重復(fù)5次。
⑦將試驗(yàn)瓶置37℃培養(yǎng)24h，數(shù)菌。
3) 結(jié)果報(bào)告: 每個(gè)樣片透過的菌落數(shù)及10個(gè)樣片透過的菌落總數(shù)。
4) 評價(jià)：每個(gè)樣片透過的菌落數(shù)應(yīng)≤5cfu，10個(gè)樣片透過的菌落總數(shù)應(yīng)≤15cfu。
2.1.7.6毒性鑒定
2.1.7.6.1檢驗(yàn)要求
接觸醫(yī)療用品與病人的包裝材料，在**前、后均應(yīng)無皮膚刺激、眼刺激與致敏作用以及無細(xì)胞毒性。
2.1.7.6.2檢測方法
按本規(guī)范2.3**劑毒理學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)中相應(yīng)的方法測試。
2.1.7.7無菌有效期鑒定
2.1.7.7.1樣品放置條件
(1)自然留樣法
將樣片放置室溫下，模擬室內(nèi)貨架貯存，每周記錄濕度與溫度，按產(chǎn)品使用說明書規(guī)定的有效期取樣檢測。
(2)加速老化法
把樣片置于溫度為60℃～65℃、相對濕度為80%±5%的干燥器內(nèi)7d后抽樣進(jìn)行檢測，相當(dāng)于室溫下放置180d。
2.1.7.7.2鑒定項(xiàng)目
(1)微生物屏障性能：按2.1.7.5 微生物屏障性能鑒定方法測試。
