總大腸菌群的測定

糞便中存在有大量的大腸菌群**，其在水體中存活時(shí)間和對(duì)氯的抵抗力等與腸道致病菌，如沙門氏菌、志賀氏菌等相似，因此將總大腸菌群作為糞便污染的指示菌是合適的。但在某些水質(zhì)條件下，大腸菌群**在水中能自行繁殖。

總大腸菌群是指那些能在35℃、48小時(shí)之內(nèi)使乳糖發(fā)酵產(chǎn)酸、產(chǎn)氣、需氧及兼性厭氧的、革蘭氏陰性的無芽孢桿菌，以每升水樣中所含有的大腸菌群的數(shù)目表示。

總大腸菌群的檢驗(yàn)方法有發(fā)酵法和濾膜法。發(fā)酵法可用于各種水樣（包括底泥），但操作較繁瑣，費(fèi)時(shí)間。濾膜法操作簡便、快速，但不適用于渾濁水樣。因?yàn)檫@種水樣常會(huì)把濾膜堵塞，異物也可能干擾菌種生長。

1.多管發(fā)酵法

多管發(fā)酵法是根據(jù)大腸菌群**能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣以及具備革蘭氏染色陰性、無芽胞、呈桿狀等特性進(jìn)行檢驗(yàn)的。其檢驗(yàn)程序如下：

（1）配制培養(yǎng)基：檢驗(yàn)大腸菌群需用多種培養(yǎng)基，有乳糖蛋白胨培養(yǎng)液、三倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)液、品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基、伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基。

（2）初步發(fā)酵試驗(yàn)：該試驗(yàn)基于大腸菌群能分解乳糖生成二氧化碳等氣體的特征，而水體中某些**不具備此特點(diǎn)。但是，能產(chǎn)酸、產(chǎn)氣的絕非僅屬于大腸菌群，故還需進(jìn)行復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)予以證實(shí)。初步發(fā)酵試驗(yàn)方法是在**操作條件下，分別取不同量水樣于數(shù)支裝有三倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)液或乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的試管中（內(nèi)有倒管），得到不同稀釋度的水樣培養(yǎng)液，于37℃恒溫培養(yǎng)24小時(shí)。

（3）平板分離：水樣經(jīng)初步發(fā)酵試驗(yàn)培養(yǎng)24小時(shí)后，將產(chǎn)酸、產(chǎn)氣及只產(chǎn)酸的發(fā)酵管分別接種于品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基或伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上，于37℃恒溫培養(yǎng)24小時(shí)，挑選出符合下列特征的菌落，取菌落的一小部分進(jìn)行涂片、革蘭氏染色、鏡檢。

品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基上的菌落：紫紅色，具有金屬光澤的菌落；深紅色，不帶或略帶金屬光澤的菌落；淡紅色，中心色較深的菌落。

伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上的菌落：深紫黑色，具有金屬光澤的菌落；紫黑色，不帶或略帶金屬光澤的菌落；淡紫紅色，中心色較深的菌落。

（4）復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)：上述涂片鏡檢的菌落如為革蘭氏陰性無芽孢桿菌，則取該菌落的另一部分再接種于裝有乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的試管（內(nèi)有倒管）中，每管可接種分離自同一初發(fā)酵管的*典型菌落1—3個(gè)，于37℃恒溫培養(yǎng)24小時(shí)，有產(chǎn)酸產(chǎn)氣者，即證實(shí)有大腸菌群存在。

（5）大腸菌群計(jì)數(shù)：根據(jù)證實(shí)有大腸菌群存在的陽性管數(shù)，查總大腸菌群數(shù)檢數(shù)表（略），報(bào)告每升水樣中的總大腸菌群數(shù)。

對(duì)不同類型的水，視其總大腸菌群數(shù)的多少，用不同稀釋度的水樣試驗(yàn)，以便獲得較準(zhǔn)確的結(jié)果。

總大腸菌群數(shù)檢驗(yàn)流程歸納于圖2－43。

2.濾膜法

將水樣注入已**、放有微孔濾膜（孔徑0.45μm）的濾器中，經(jīng)抽濾，**被截留在膜上，將該濾膜貼于品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基上，37℃恒溫培養(yǎng)24小時(shí)，對(duì)符合發(fā)酵法所述特征的菌落進(jìn)行涂片、革蘭氏染色和鏡檢。凡屬革蘭氏陰性無芽孢桿菌者，再接種于乳糖蛋白胨培養(yǎng)液或乳糖蛋白胨半固體培養(yǎng)基中，在37℃恒溫條件下，前者經(jīng)24小時(shí)培養(yǎng)產(chǎn)酸產(chǎn)氣者，或后者經(jīng)6—8小時(shí)培養(yǎng)產(chǎn)氣者，則判定為總大腸菌群陽性。

由濾膜上生長的大腸菌群菌落總數(shù)和所取過濾水樣量，按下式計(jì)算1升水中總大腸菌群數(shù)：